蛋白质双向电泳及质谱技术.ppt

有机荧光团染料 包括共价结合和非共价结合的荧光团染料两类，后者最为常用，其典型代表是已经商品化的SYPRO Red、 Orange、 Ruby等荧光染料 可对SDS胶内蛋白质进行一步染色，约30~60min完成 灵敏度为2~10ng其线性范围为3个数量级 在Tris/甘氨酸转印缓冲液中染色后，蛋白质可被转印至膜上并进行免疫染色或Edman测序来鉴定蛋白质 金属螯合染料 与现代蛋白质组学研究相兼容的 专门与常用微量化学表征过程兼容 不包含戊二醛、甲醛或Tween-20等，很容易和集成化蛋白质组学平台（包括自动化凝胶染色仪、图像分析工作站、机器人剪切仪器、蛋白质酶解工作站和质谱仪等）相结合 染色方法 凝胶的图像处理分析 典型流程 凝胶图像的扫描 图像加工 斑点检测和定量 凝胶配比 数据分析 数据呈递和解释 2-DE数据库的建立 2-DE 分离的可溶性 E. coli 蛋白 目前双向电泳需解决的问题 样品的制备及溶解 不溶性蛋白(膜蛋白及核内蛋白) 难分离蛋白(如毛发及皮肤中的蛋白) 载样量的提高 初步分离 低丰度蛋白、碱性蛋白及大分子量蛋白 定量分析 灵敏度及可重复性 对于双向电泳的建议 首先采用宽pH范围的胶条，确定蛋白的分布范围，通常采用pH3-10的胶条 如果pH线性分布的胶条分离效果不好，可采用非线性胶条 加大蛋白上样量，提高局部蛋白的分辨率 采用窄pH范围的胶条，提高某