课件：药用酶的生产技术.pptVIP

* * * 调节基因 操纵基因 结构基因 mRNA 酶蛋白 阻遏蛋白不能与操纵基因结合， 结构基因表达 调节基因 操纵基因 结构基因 辅阻遏物trp 代谢产物与阻遏蛋白结 合，使之构象发生变化 与操纵基因结合，结构基因不能表达 色氨酸操纵子（酶的阻遏） ----------阻遏物和操纵基因的调节 (2)、真核生物合成的调节 真核生物比原核生物的结构复杂，其基因的表达 和调控亦复杂得多，目前尚无统一的理论和模型来阐 述真核生物中酶生物合成的调节规律。 ① 细胞分化改变酶的生物合成（参见P187） ② 抗原诱导抗体酶的生物合成（参见P188） 二、药用酶生产细胞的选择 基本要求： 不是致病菌 发酵周期短,产酶量高 不易变异退化 最好是产生胞外酶的菌种,利于分离。 对医药和食品用酶,还应考虑安全性： 凡从可食部分或食品加工中传统使用的微生物生产的酶,安全! 由非致病微生物制取的酶,需作短期毒性实验。 非常见微生物制取的酶,需做广泛的毒性实验,包括慢性中毒实验。 （一）微生物 (1) 大肠埃希氏杆菌，简称为大肠杆菌，是最为著名的原核生物。 形态：短杆或长杆状，0.5～1.0×1.0～3.0 um，革兰氏阴性，运动(周毛)或不运动，无芽孢，一般无荚膜。菌落呈白色至黄白色，扩展，光滑，闪光。 Escherich属菌株和大多数大肠杆菌是无害，但也有些大肠杆菌是致病的，会引起腹泻和尿路感染。 大肠杆菌的名声主要因它易于在实验室操作、生长迅速，而且营养要求低。 应用： 大肠杆菌能作为宿主供大量的细菌病毒生长繁殖 大肠杆菌也是最早用作基因工程的宿主菌 工业上生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和 制备天冬氨酸、苏氨酸及缬氨酸等 (2) 醋酸杆菌（Acetobacter） 菌体从椭圆至杆状，单个、成对或成链，革兰氏阴性，运动（周毛）或不运动，不生芽孢。好气。含糖、乙醇和酵母膏的培养基上生长良好。 应用：有机酸(食醋等）葡萄糖异构酶(高果糖浆 )山梨糖 (维C中间体） (3)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 直状、近直状的杆菌，周生或侧生鞭毛，革兰氏阳性，无荚膜，芽孢0.5×1.5?1.8?m，中生或近中生。 枯草芽孢杆菌是工业发酵的重要菌种之一。生产淀粉酶、蛋白酶、5’-核苷酸酶、某些氨基酸及核苷。 (4) 根霉(Rhizopus) 分类学上属于藻状菌纲，毛霉目，根霉属。 根霉因有假根（Rhizoid）而得名（假根的功能是在培养基上固着，并吸收营养）。 分布于土壤、空气中，常见于淀粉食品上，可引起霉腐变质和水果、蔬菜的腐烂。 代表种：米根霉（R.oryzae)黑根霉(R.nigrican)等。 应用：根霉能产生一些酶类，如淀粉酶、果胶酶、脂肪酶等，是生产这些酶类的菌种。在酿酒工业上常用做糖化菌。有些根霉还能产生乳酸、延胡索酸等有机酸。 (6)曲霉(Aspergillus) 分类：多数属于子囊菌亚门，少数属于半知菌亚门。 分布：广泛分布于土壤、空气和谷物上，可引起食物、谷物和果蔬的霉腐变质，有的可产生致癌性的黄曲霉毒素。 代表种：黑曲霉Asp. Niger、黄曲霉Asp.flavus 应用：是制酱、酿酒、制醋的主要菌种。是生产酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、果胶酶）的菌种。生产有机酸（如柠檬酸、葡萄糖酸等）。农业上用作生产糖化饲料的菌种。 回本节 （二）植物细胞 植物细胞培养主要用于色素、药物、香精、 酶等次生代谢物的生产（参见P190）。 （三）动物细胞 动物细胞培养主要用于疫苗、抗体、激素、多 肽、酶等功能蛋白的生产，通过该方法生产的药用 酶不多（参见P190）。 三、药用 酶的生产工艺条件与控制 2、培养基 3、发酵条件及控制- Transcription 4、提高产酶的措施- Translation Go Go Go Go 1、药用酶生产的工艺过程 （一）、药用酶生产的工艺过程 酶生产的工艺流程（参见P190） 1、大肠杆菌发酵生产天冬酰胺酶（参见P191） 2、大蒜细胞培养生产超氧化物岐化酶（参见P191） 3、人黑色素瘤细胞培养生产组织纤溶酶原激活剂（参见P191） （二）、培养基 各种生物对营养的需求 1、选择适宜的营养物质 2、营养物的浓度及配比合适 3、物理、化学条件适宜 4、经济节约 5、精心设计、试验比较 培养不同的微生物必须采用不同的培养条件； 培养目的不同，原料的选择和配比不同； 不同阶段，培养条件也有所差异。 培养基的设计原则 五大要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、水 培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础 培养基（medium）是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。 任何培养基都应