AFLP标记对灯盏花遗传多样性和选育品系群体一致性研究.docxVIP

AFLP标记对灯盏花遗传多样性和选育品系群体一致性研究 ［摘要］目的：对灯盏花群体种质资源进行分析， 为灯盏花的品种选育提供依据。 方法：用筛选出来的11对引物对采自云南泸西、昆明、 大理、丘北、石林的6份灯盏花种质资源进行AFLP遗传多 样性分析。 结果：①11个引物在6份种质资源中共产生636条DNA 片段，其中604条带为多态性条带，约占82. 40%0②在相 似系数为0. 706时，6份不同地区的灯盏花可聚为3类，第 1类包括千山1号和千山2号大部分样品及大理、石林、昆 明3个地区的野生居群；第2类为丘北的野生居群；第3类 主要为部分千山2号及其他地区样品。千山1号和千山2号 灯盏花平均遗传相似系数大，遗传相似系数变幅小，品系内 遗传分化较小，遗传性状较稳定；③对6份灯盏花样品的 分子系统聚类分析表明：地理来源相同的部分有相对聚合现 象或少部分品系出现交差聚类，与其亲缘关系较近有关；丘 北居群自行一类，与其特异的遗传基础差异较大有关。 结论：AFLP对灯盏花的遗传多样性分析具有可靠性；系 统选育对灯盏花的育种具有可行性。 ［关键词］灯盏花；AFLP；遗传多样性；选育品系 灯盏花 Erigeron breviscapus (Vant) Hand.-Mazz.为 菊科Asteraceae飞蓬属Erigeron L.多年生草本植物［1］, 又名灯盏细辛或短尊飞蓬，主要分布于我国西部和西南部的 云南、四川、贵州、广西、西藏、湖南等省(区)［2］。具 有散寒解表、祛风除湿、舒筋活血、消积止痛等功效，灯盏 花的主要化学成分灯盏乙素是治疗闭塞性脑血管疾病和脑 溢血后遗症的天然特效药物［3］,云南省灯盏花常年采集量 在1 000 t以上，近年对云南省灯盏花原分布区进行资源调 查时，已难见到有成片的灯盏花，植株分布频度已接近稀少 或枯竭［4］。灯盏花的人工育种和栽培愈来愈重要，但由于 灯盏花栽培历史短，育种研究基础薄弱。 在系统考察云南灯盏花种质资源的基础上，采集种质资 源并建立了种质资源圃［4］。经过多年的引种驯化研究与实 践，在云南省泸西县收集野生种质资源，用系统选育法从中 筛选出灯盏乙素达到2. 46%?2. 70%,灯盏乙素达到6 24? 90. 60 kg?hm-2的灯盏花优质种源3份［5］。灯盏花为异花 授粉植物［6-8］,天然异交群体内变异丰富［9-12］ o变异系 数达50. 00% ［13］,因此可以通过选择育种的方法，充分利 用居群水平和居群水平以下的个体间的遗传变异，筛选选育 优质种源或选育优质品种［14］ o经过对灯盏花种植技术及栽 培习性等方面进行了研究，对种质资源的筛选，选用了采自 云南省泸西、丘北、个旧等地QS-1至QS-6等6份种源进行 了实验比较，种源QS-1, QS-3和QS-6在产量和有效成分含 量方面表现较好，引种栽培后的灯盏花个体较野生条件下大 [5]。同样用系统育种的方法，从驯化栽培的灯盏花天然异 交群体中选择单株，得到的2个灯盏花新品系灯盏乙素和单 产都比对照提高：15] o但是目前这些选育出来的品系都缺乏 对群体一致性的研究。 目前已采用生物学特性及表型的分析[16],等位酶分析 [12], RAPD技术[17-18], ISSR分析[19]等技术对灯盏花遗 传多样性进行了初步研究，研究表明灯盏花种质资源有较高 的遗传多样性oAFLP标记是对基因组DNA进行分析的分子标 记技术，与其他的分子标记技术相比，它可以在全基因组范 围内对多个不同的遗传位点同时进行变异分析，而较少受到 基因组特征性序列的影响，是进行遗传多样性分析及分子鉴 别的首选技术之一 [20]。 本文利用优化过的AFLP分子标记方法[21],对系统选 育出的、在生产上广泛应用的2个灯盏花品系（千山1号， 千山2号）以及云南一些野生居群进行了遗传比较分析，检 测灯盏花系统选育的效果，探明AFLP标记在灯盏花选育品 系内及品系间的遗传检测的适用性，同时对灯盏花不同地理 居群的亲缘关系做了分析，为灯盏花种质资源的利用和遗传 改良提供依据。 1材料 材料选自泸西千山公司所培育的千山1号（QS-1）、千 山2号（QS-2）,以及作为对照的采自石林、昆明、大理、 丘北野生居群的样品。经云南农业大学杨生超教授鉴定，样 品为灯盏花E. breviscapuso 高速台式微量冷冻离心机（日本HITACHI）.数显恒温水 浴锅（国华电器有限公司HH-4）、电泳仪（北京六一）、制冰 机（SANYO SIM-F123）.高压蒸汽灭菌锅（SANYO）.冰箱（中 科美菱）、超低温冰箱（Haier）、梯度PCR仪（biometra 070-851）、凝胶成像系统（UVP S/N A030711-002）o 2方法 1试验设计 用优化过的AFLP体系进行