解冻后2细胞发育成囊胚建立人胚胎干细胞系.docVIP

冻融后2细胞胚胎发育至囊胚建立人胚胎干细胞系 杨 华1，刘 锋1，王 钦1，邓志华1，邹 彦1，史秋雯1，丘 映1，李东升2 （530031 南宁，广西南宁市第二人民医院生殖医疗中心1；442000 湖北 十堰，湖北省太和医院，郧阳医学院胚胎干细胞重点实验室2） [摘要] 目的 用解冻后废弃胚胎及部分患者捐献的冷冻胚胎建立胚胎干细胞系。方法 用程序解冻法解冻2001—2007年来我生殖中心就诊的患者剩余冷冻胚胎，培养至囊胚，Pronase酶去除透明带后，全囊胚置于小鼠饲养层（MEF）中培养获得原代细胞，机械法结合Ⅳ型胶原酶消化法传代，并利用细胞形态观察、免疫荧光染色、核型分析、畸胎瘤切片胚层分析等方法对所建胚胎干细胞系进行鉴定。结果 序贯培养23枚废弃胚胎，有4枚培养到囊胚阶段；去除透明带后有2枚在MEF上贴壁生长，但只有1株成功扩增稳定传代至第80代；细胞集落呈典型的鸟巢状，有稳定的46XY核型；表达SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81抗原，RT-PCR检测有Nanog、Oct-4、Sox2等基因表达；同时在体外能分化为内、中、外3个胚层。结论 解冻后2～3细胞Ⅲ～Ⅳ级的废弃胚胎仍具有发育形成囊胚的潜能，并利用所得囊胚采用酶去透明带全胚培养法能建立稳定增殖的hES细胞系。 [关键词] 人胚胎干细胞系；废弃胚胎；2细胞 [中图法分类号]