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TSP-1在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义 龚仁国1王晓毅2宣鸣2 (1攀枝花学院附属医院口腔科 四川攀枝花617000) (2四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科教研室 四川成都610041) 【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231 (2010) 08-025-03 【摘要】TSP?1蛋白在唾液腺腺样囊性癌中表达增高，提示它可能在肿瘤的发牛 和发展中具有一定的作用。 【关键词】TSPJ蛋白 腺样囊性癌 免疫组织化学 血小板反应蛋白一1 (TSP-1)是血管生成最重要的调节因子之一，血管生 成促进因子和抑制因子之间形成动态平衡，当这一平衡倾向于血管生成促进因子 时，则新牛血管形成;倾向于血管牛成抑制因子时，则不发牛新牛血管形成，肿 瘤趋向于局限和稳定。 腺样囊性癌(ACC),浸润性极强，易局部复发；易沿神经扩散；易血行 性转移，转移率高达40%。木实验采用免疫组织化学方法研究TSP?1在ACC中 的表达水平，并分析其与临床病理指标之间的关系，以探讨TSPJ在ACC发生发 展中的作用及意义。 1材料与方法 1.1组织标木 收集四川大学华西口腔医院1998-2003年间ACC石蜡标木45例，男 20例汝25例；年龄27?70岁，中位年龄47岁。10例正常唾液腺组织，其中腮 腺6例，来自经组织病理学证实无颈部淋巴转移的颈清扫腮腺下极，并经病理证 实为正常的腮腺组织；舌下腺4例，取自舌下腺囊肿患者的舌下腺，经病理证实 为正常舌下腺。 1.2试剂 浓缩型鼠抗人TSP-1单克隆抗体(购自福州迈新生物技术有限公司， Neomarkers公司产品)，工作浓度为1： 100；链酶菌抗生物素蛋白一过氧化物酶 复合物(S-P)试剂盒：购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3实验方法 采用免疫组织化学S?P法，主要步骤如下：石蜡包埋组织切片常规脱蜡 水化后，蒸憾水漂洗5min。3%的H2O2室温下孵育30分钟以阻断内源性过氧 化物酶活性；沸水中枸椽酸缓冲液预热后，热修复组织抗原20min；自然冷却, 蒸徭水冲洗3次，每次5min；滴加一抗(TSP?1抗体)，4°C冰箱中过夜；恢复室 温，PBS冲洗3次,每次5min；滴加二抗，37°C烘箱孵育30分钟,PBS冲洗3 次，每次5min；加新鲜配制的DAB溶液显色；自来水冲洗，苏木精复染，中性 树脂封固。以PBS代替一抗作为阴性对照，用已证实TSP-1阳性的人脐带组织切 片为阳性对照。 1.4结果判定 光镜下随机观察5个400倍视野，以细胞浆呈棕黃色或棕色为阳性，计 数不少于500个细胞中进行细胞计数及评分，根据染色程度及染色细胞百分率进 行分析评分。参照Schindl和Neufeld等的方法记分：A项:按有无着色及着色强 度(以多数阳性细胞呈现的染色为准)计分:不着色为0分，淡黄色为1分，棕黃色 为2分，棕褐色为3分;B项:按阳性细胞百分率，1%?10%为1分，11%?50%为 2分,gt;51%为3分。计算每张切片的染色积分=Atimes;B,以得分0?2分为 阴性(?)，3?4分为弱阳性( + ), 5?7分为中度阳性(++), 8?9分为强阳性(+++) 表达。 染色结果判定：由两名病理科医师盲法独立阅片完成，同时通过HE染 色切片观察，证实所有标本为腺样囊性癌或正常腺体组织。 1.5统计学处理 应用SPSS13.0软件进行统计学分析。对各组TSP-1阳性表达率进行X2 检验，检验水准为alpha; = 0.05。 2结果 2.1 TSP-1蛋白在正常唾液腺及ACC中的表达 TSP-1蛋白免疫组化染色阳性产物呈棕黄色或棕色，主要分布于细胞浆 内oACC中TSP-1表达高于正常唾液腺，两者之间差异具有统计学意义。(见图1? 2,表 1)。 图1 TSP-1在正常唾液腺表达较低(times;200) 图2 TSP-1在ACC腺样型中高表达(times;200) 2.2 TSP-1蛋白表达与临床病理指标的关系 本研究中TSP-1的表达与临床分期及转移有关(见表2)。 3讨论 腺样囊性癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一。该瘤侵袭性强，手术 切除不易彻底，复发率高，而且极容易侵入血管，造成高的血行转移率。 TSP-1主要存在于血小板alpha;颗粒中，在许多正常细胞及肿瘤细胞中 均有广泛的表达。TSPJ作为一种重要的细胞外基质糖蛋白通过与其相应的细胞 表面受体结合，激活多种信号传导途径从而发挥多种生物学功能。 TSP-I由Baenziger等首次从凝血酶刺激后的血小板细胞膜中分离。1986 年,Lawler和Hynes克隆出了 TSP?1的cDNA编码序列。它的编码基因位于15ql5, 全长约16 kb,含22个外显子，读码框约5.8 kb,在启动子区域包含多个转录因