第5章-发酵产物的提取精制.ppt

第五章发酵产物的提取精制 发酵液的特性及提取精制工程概要 发酵液的预处理及菌体分离 发酵产物的提取 发酵产物的精制 一、发酵液的特性： 水分多，有效含量较低 有菌体悬浮 溶有培养基配制的盐类 有一定量的副产物 产物本身可能被酶利用，能进一步分解 产物具有生物活性，稳定性差 发酵产物的提取及处理影响着发酵生产的效率 二、提取精制——下游加工过程 下游加工所处地位 发酵产品生产中，分离和精制费用占绝大部分，因此下游加工过程的落后会阻碍生物技术的发展。 下游加工过程 在微生物发酵过程，酶反应过程或动植物cell大量培养过程中，从发酵液，反应液或培养液中分离、精制有关产品的过程。 由一些化学过程的单元操作组成。 三、下游加工的原则和要求 原则： 1）短时间内处理 2）分离时尽量低温 3）选择生物物质稳定的pH 4）要程序化进行清洗，消毒，包括厂房，设备，管路 要求： 1）达到所需的纯度 2）成本要低，得率高 3）工艺过程要简便，对分离物质特性清楚 4）废弃物要易处理，能够做到综合利用（零排放；清洁生产） 5）实验室产品能够放大生产 四、下游加工的流程 下游加工的一般流程，分为四个阶段 发酵液的预处理和固液分离 初步纯化（提取） 高度纯化（精制） 成品加工 发酵液 ↓ 预处理（加热、调pH、絮凝、浓缩） ↓ 细胞分离（过滤、离心、错流过滤） ↓ 细胞破碎（匀浆器、球磨机 ） ↓ 细胞碎片分离（离心、双水相萃取） ↓ 初步纯化（沉淀、吸附、离子交换、萃取、超滤） ↓ 高度纯化（沉淀、超滤、层析、结晶） ↓ 成品加工（浓缩、无菌过滤、干燥） 发酵液的预处理 目的：改变发酵液性质，包括黏度、pH值、浓度等，以利于固液分离 一、发酵液的预处理方法 1）无机离子去除：盐沉淀 Mg2+：三聚磷酸钠 Fe3+：磷酸盐 Ca2+：用草酸（溶解慢）或草酸钠 一、发酵液的预处理方法 2）杂蛋白去除：根据蛋白质是两性物质 酸性溶液中：用阴离子化合物，三氯乙酸、水杨酸盐、苦味酸、钨酸鞣酸盐，加入0.5%-0.1% 碱性溶液中：用离子，Ag+,Cu2+,Zn2+,Fe2+,Pb2+ 加热处理，使蛋白质变性，关键：提取物是否热敏感 大幅度改变pH值，使之下降 加金属盐，如明矾（凝固作用）或食盐（变性） 一、发酵液的预处理方法 3）凝聚和絮凝技术去除菌体——凝聚 功能：细胞聚集，增大体积，易于过滤。 凝聚能力：Al3+、Fe3+、H+、Ca2+、Mg2+、K+、Na+、Li+ 常用凝聚剂：明矾(最好且便宜，但排污水使土壤酸化)、Al2O3、FeCl3、ZnSO4、MgCO3 一、发酵液的预处理方法 3）凝聚和絮凝技术去除菌体——絮凝 凝絮：指在某些高分子絮凝剂存在下，有架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理聚合为主的过程。 常用絮凝剂：聚丙烯酰胺类衍生物：非离子型、阴离子型（羧基）、阳离子型（胺基） 优点：用量少，ppm级（mg/mL），絮凝体粗大，凝絮速度快，种类多，应用范围广。 缺点：有一定的毒性，尤其是阳离子型的毒性强，不能在食品和医药工业中应用 阴离子性无毒可应用 （一）过滤——板框过滤 聚苯烯材料，使用于颗粒大黏度小液体，过滤时可加压，压力不能超过3kg 不适用于固相比较多液体澄清 过滤：分为加压、常压、真空过滤 常用设备： 板框压滤机：分为明流式，暗流式（用于挥发性、腐蚀性、毒性物质的过滤分离） 适用于： 液体产物澄清 低浓度悬液或胶体悬液 黏度高，经加热100℃或1kg压力的悬浮液 接近饱和状态的溶液 优点： 结构简单，过滤面积大（单位） 成本低，动力消耗少，推动力大，耐腐蚀 再生消耗不多，基本无维修，经济实用 缺点： 间歇操作，不能绝对密封 劳动强度大，随着滤饼堆厚，过滤速度下降 型号：BAS、BMS、BMY、BAY BAY40—635/25 B——板框 A——暗流 Y——油压 40——过滤面积m2 635——框内尺寸 25——板框厚度mm 影响过滤的因素： 1）微生物种类及生长形态：微生物个体大小 2）生长状态：是否自溶，黏度上升 3）培养基的组成及黏度：最好是清料发酵 4）pH值：适当提高pH有利于过滤（保证不失活时） 5）温度 6）过滤时是否加入助滤剂：常用活性炭和硅藻土 7）过滤压力：适当提高，可提高过滤速率 8）滤布清洗：每次使用滤布必须清洗 添加电解质、絮凝剂、硅藻土等助滤剂 开始过滤时，压力差不能太大，以免压紧、压实颗粒，阻塞滤孔，稳定后均匀加料，保持滤饼疏松。 降低滤液黏度，对热不敏感的高黏度物质，可用加热等方