耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因组DNA文库的.doc

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选? ?基金项目: 国家自然科学基金30772061） Supported by National Natural Science Foundation of China 30772061） 作者简介: 原薇薇，女，四川人，硕士研究生，主要从事抗微生物感染研究。E-mail: wwtcso4@126.com 通讯作者: 饶贤才，电话：（023E-mail: xcrao@ 收稿日期: 修回日期: 原薇薇，杨杰，王冬梅，胡珍，朱军民，陈志瑾，张俊磊，王嘉丽，刘佳，饶贤才 （第三军医大学微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室，重庆，400038) 摘 要: 目的 通过建立细菌双杂交技术，筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白，为深入探讨PBP2a介导MRSA耐药机制奠定基础。方法 利用PCR扩增，获得PBP2a蛋白的编码基因mecA,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA，经Sau3AI部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHI位点，获得基因组DNA表达文库；将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选，获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物，对猎物中编码序列进行DN