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中药材中革柔质含量测定方法的研究与优化 摘要：参照药典,采用磷钮钩酸-干酪素比色法，以没食子酸为对 照测定五倍子、地榆药材中辣质的含量。探讨药典中规定的条件合理 性，并增加了超声条件优化了实验，平均加样回收率为97. 39 %o本 法可快速、准确地用于中药材中隸质的含量测定，并可作为辣质提取 工艺的优化方案。 关键词：隸质测定;波长；室温浸提；干酪素；没食子酸；超声 糅质又称单宁(Tannins),是一类复杂的具有沉淀蛋白质性质的 水溶性多元酚类化合物，广泛存在于植物药材，如五倍子、贯众、儿 茶等。近年来，对隸质生理活性的研究方兴未艾。研究表明，隸质能清 除生物体内过剩的自由基,维护细胞膜的流动和蛋白质的构象，防止 辐射诱发的DNA断裂，从而在抑制脂质过氧化、心血管病、抗癌、 抗突变、抗衰老、抗白内障等方面有独特功效。糅质的经典含量测定 方法有很多种，如重量法、容量法、比色法等。最常用的有皮粉法、 高镭酸钾法、干酪素法、络合量法。皮粉法是国际公认的革柔质含量测 定方法。皮粉的主要成分是蛋白质，革柔质可通过分子中的酚羟基与蛋 白质的酰胺基形成氢键而结合成不溶于水的沉淀，以重量法测定含量。 《中国药典》一部［1］辣质含量测定法一直沿用皮粉法，适用范围广。 缺点是耗用样品多，测定时间长，且没有选择性,测定结果偏高，而 且皮粉用量很大。近年来，皮粉试剂的供应和质量都很难保证,使皮粉 法的应用受到很大限制。《英国药典》2002版［2］隸质测定法附录采 用的是磷钮钩酸-皮粉比色法，即利用辣质在碱性溶液中将磷铝餌 酸还原产生深蓝色，其吸收度与含量成正比，采用比色法测定。其中, 以焦性没食子酸为对照，测定总酚和不被皮粉吸附的酚，二者之差计 为糅质的含量。 罗文毓等报道了改进的干酪素法[3],其关键步骤是以干酪素代 替皮粉，采用磷钥鹄酸比色法测定；药材样品提取釆用浸泡过夜代替 加热回流提取等。本文参照《英国药典》和干酪素法,重点对提取方 法、显色剂、干酪素用量等进行了比较,提出了隸质含量测定方法, 为药典相关附录方法的修订提供了实验基础。《中国药典》[4]2015 年版2202隸质含量测定法已为没食子酸为对照，测定测定总酚和不 被干酪素吸附的酚,二者之差计为辣质的含量。并且同时进行干酪素 吸附空白试验，计算吋扣除空白值。实验为避光操作。[4] 本研究对中药主要的化学活性成分一糅质提取工艺的优化，有利 于地榆资源进一步的开发、利用，并为中药材有效成分的富集提供理 论依据。并改进隸质含量测定方法。 1仪器与试剂 18系列紫外可见分光光度计【2007 （C）北京普析通用仪器有限责任 公司】；KQ-250B型超声波清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）。 钩酸钠、钳酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠;磷酸、盐酸、干酪素、隸酸 （分析纯）；焦性没食子酸、没食子酸对照品（中国药品生物制品检 定所，经色谱分析，纯度＞98%,）;五倍子、地榆药材（购自中药材 市场）。 2 实验方法探究 1 测定波长的选择探究 取对照品、总酚和不被吸附的多酚比色液，在400?lOOOnm波 长测定，结果三种比色液均在760nm具最大吸收。绘制不同波长总 酚比色液吸收曲线和不被吸附的多酚比色液吸收曲线。 结果表明，确定测定糅质含量最大吸收波长为760nmo 2 供试品溶液制备方法的比较探究［5］ 《英国药典》2000版隸质测定法药材供试液提取方法采用加热提 取，罗文毓等报道，蘇质遇热不稳定，采用室温浸提过夜的方法操作 简单，提取完全。本试验对加热和冷浸提取两种方法进行了比较。分 别测定次数5次。冷浸过夜提取测定含量高于加热提取法，且操作较 简单。 结果表明，测定隸质含量供试品处理应采用室温浸提过夜的提取 方法。 3 吸附剂的比较探究［5］ 《英国药典》法采用皮粉作为吸附剂测定不被吸附的多酚类。参考 文献［3］干酪素对隸质的吸附更具专属性，即可选择性吸附有生理活 性革柔质，而革柔酹等非活性糅质则不被吸附,选择性较皮粉法高。以革柔酸 为例，试验分别采用皮粉和干酪素为吸附剂，测定含量。结果皮粉法 测定值为81118 %，干酪素法测定值为62126 %o 结果表明，测定革柔质含量吸附剂应为干酪素。 2. 4干酪素用量的比较探究 试验考察了干酪素的用量对测定五倍子革柔质含量结果的影响。干 酪素用量的影响：干酪素不同用量时测定含量3次取其平均值，测 得干酪素用量和对应测得的含平均值为 下:0. 15g-18. 26%, 0. 30g-23. 24%, 0. 45g- 32. 72%, 0. 60%g- 32. 82% , 0. 75g-32. 62 % , 0. 90g- 32. 86% 结果表明，对于测定样品， 三倍取样量的干酪素用量基本可吸附完全。试验使用干酪素0.6克。 ⑸ 结果表明，测定糅质含量