免疫细胞功能检测技术.docVIP

最新各类医学考试课程联系Q第十五章　免疫细胞功能检测技术 　　免疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致可分为两类，一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等；另一类能捕获抗原，处理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。测定这些细胞功能可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。 第一节　淋巴细胞的功能检测 　　淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。　　体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；　　体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。 　　一、T细胞功能检测　　T细胞具有多种免疫生物学功能，如直接杀伤靶细胞、辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原或丝裂原刺激产生增殖反应及产生各种细胞因子。据此，建立了一系列检测T细胞功能的体内和体外试验。　　（一）T细胞增殖试验　　1.原理：T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞增殖，并转化为淋巴母细胞。因此，淋巴细胞增殖反应又称淋巴母细胞转化。　　2.刺激物：植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌等。 　　3.方法学：检测T细胞增殖反应的方法有：　　（1）形态学检查法：运用普通光学显微镜，简便易行。缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。　　（2）3H-TdR掺入法：敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，及存在放射性核素污染问题。　　（3）MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。较常采用。 　　（二）T细胞分泌功能测定　　体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术通过对于T细胞分泌细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。　　（三）T细胞介导的细胞毒试验　　常选用可传代的已建株的人肿瘤细胞，与待检淋巴细胞混合，观察肿瘤细胞杀伤的情况。是评价机体细胞免疫水平的常用指标，特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力，常作为判断预后和观察疗效的指标之一。 　　（四）体内实验　　正常机体对某种特殊抗原建立了细胞免疫后，如用相同的抗原做皮肤试验，常可出现阳性的迟发型超敏反应。目前临床上常用于诊断某些病原微生物感染（结核、麻风等）和细胞免疫缺陷等疾病，也常用于观察细胞免疫功能在治疗过程中的变化及判断预后等。　　1.特异性抗原皮肤试验：常用的特异性抗原皮肤试验为结核菌素皮肤试验。其他皮试抗原还有白色念珠菌素、皮肤毛癣菌素、腮腺炎病毒等。受试者对所试抗原过去的致敏情况直接影响试验结果。若受试者从未接触过该抗原，则不会出现阳性反应，因此阴性者也不一定表明细胞免疫功能低下。为避免判断错误，往往需用两种以上抗原进行皮试，综合判断结果。　　2.PHA皮肤试验：将定量PHA注射到受试者前臂皮内，可非特异性刺激T细胞发生母细胞转化，呈现以单个核细胞浸润为主的炎性反应。PHA皮肤试验敏感性高，比较安全可靠，临床常用于检测机体的细胞免疫水平。 　　二、B细胞功能检测　　B细胞主要产生Ig参与机体体液免疫应答，B细胞功能低下或缺乏者对外源性抗原刺激的应答能力减弱或缺陷，特异性抗体产生减少或缺如。因此，B细胞功能试验方法有受试者血清Ig含量检测和体外B细胞增殖和产生抗体能力检测等。　　（一）B细胞增殖试验：原理与T细胞增殖试验相同，但刺激物不同，小鼠B细胞可用细菌脂多糖（LPS）作为刺激物，人则用含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及抗IgM抗体等刺激。　　（二）溶血空斑试验　　1.原理：将SRBC免疫的小鼠脾脏（或家兔淋巴结）制成单个细胞悬液，与SRBC在琼脂糖凝胶内混合后倾注于小平皿或玻片上。脾细胞中的抗体生成细胞释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC致敏，在补体参与下可将SRBC溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，空斑数目即为抗体形成细胞数。空斑大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少。 　　2.方法学　　（1）经典溶血空斑形成试验：用于检测实验动物抗体形成细胞的功能。可分为直接法和间接法。直接法所测到的细胞为IgM类抗体形成细胞，其他类型的Ig由于溶血效应较低，不能直接检测；间接法，即在小鼠脾细胞和SRBC混合时，再加抗鼠Ig抗体（如兔抗鼠Ig），使抗体产生细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物,此时能活化补体导致溶血。上述直接法和间接法都只能检测