课件：FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用.ppt

免疫分型的临床意义 ? 弥补FAB分型的不足 ? 诊断其他血液系统肿瘤 ? 诊断仅表达个别非本系列相关抗原的急性 白血病（LY+—AML、MY+—ALL） ? 急性双系或双表型白血病的诊断 ? 骨髓增生异常综合征（MDS）免疫表型分析的临床意义 ? 免疫分型对鉴别慢性淋巴细胞增生性疾病各亚型亦有肯定的诊断价值 以下为各系列较特别的标志： AML： MPO、 CD33、 CDl3、 CDl4 CDl5、 CDllb、 CDllc T-ALL： c／mCD3、 CD2、 CD5、 CD7、 CD4／CD8、 CD38 B-ALL： cCD22、cCD79、 CDl9、 CDl0、 CD24、 HLA—DR、 CD20、 CD38 造血干／祖细胞: CD34、 CDll7、 CD38、 HLA-DR、 ACl33 在AML各亚型的免疫分型中有时仍较难分辨，有以下特点可供参考： ①CD41、CD61是巨核细胞的标志，见于FAB—M7，但 血小板粘附于某细胞上可造成假阳性。 ② CD71与血型糖蛋白是红系的标志，见于FAB—M6型。 ③ CDl4、 CD64是单核细胞的标志，见于M4或M5。 ④ FAB—M3，t(15；17)者典型的免疫表型是CDl3+、 CD33+、 CD9+、 CD38+、 CD34-、 DR-。 ⑤ t(8；21)M2的表型为 CDl3+、 DR+、 CD34+、 CD33+、 CDl5+、 CDl9+或CD56+。 ⑥ M0与M1较难区分，应有髓系标志而无淋系标志，胞浆MPO应阴性。 CD34及DR在M0较强，并可伴有CD7与CD4。 ⑦ CDll7+多见于AML。 ⑧ CD7常与CD34共表达， CD4见于M4、M5。 CD2+见于M4Eo，往往伴有16号染色体异常。 M3亦可有 CD56+表达。正常粒细跑可表达 CDl0。由此可见，单抗本身有其多向性，勿轻易判断为杂合型白血病。 ⑨ T／B—ALL可分为几个亚型，然而对临床价值不大。但若B—ALL伴有CD34表达时，应进一步作遗传学与基因检测，以确定是否是Ph+ALL，不论是M—bcl/abl或m-bcr／ablmRNA阳性者，其预后均较差，应接受大剂量化疗或早期接受异基因骨髓移植。 FCM检测白血病微小残留病变(MRD): 过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠，因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特征， FCM检测的敏感度可明显提高 白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应的正常血细胞 如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或阴性。 相应正常细胞 CDl0+的细胞荧光强度约为2个对数值， CD45为阳性。若能定量则更可靠。 FCM在临床肿瘤学中的应用 1.血液标本的检查 肿瘤患者的免疫功能检查 肿瘤患者的粘附分子检查 ICAM-1 CD54 ICAM-2 CD102 ICAM-3 CD106 CD62、CD63、CD42a/b、CD41/61、TSP (2) 肿瘤实体标本的FCM检查 耐药基因检查 粘附分子检查 细胞凋亡检查 细胞DNA分析 增殖性核抗原 肿瘤细胞耐药性筛选 肿瘤相关抗原 激素受体 与癌细胞生物行为有关的因子，如CD44 组织标本的正确处理： 去除脂肪、结缔组织 洗涤除去红细胞 用眼科剪剪成肉糜状 用250至350目的铜网过滤 要求： 细胞碎片、细胞连片少，单细胞要多 利用特殊的荧光染料(PI、EB、AO等) 与细胞内DNA碱基结合，被这些荧光染料染色的细胞在激光照射下发射出荧光，荧光强度与DNA含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量。 细胞DNA分析原理 细胞周期与DNA的倍体关系 DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指标: 良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞； 实体瘤以多倍体居多； 实体恶性肿瘤的非2倍体出现率70%,淋巴瘤和白血病以亚二倍体居多,出现率达50%。 交界性肿瘤形态学介于良恶性之间,难于监别。如果交界性肿瘤出现异倍体即已具有恶性特征,尽管病理形态学尚不能证实,也应视为恶性。 观察病情演变 判断预后 非整倍体的肿瘤恶性程度高，复发率高，预后差。 近二倍体和二倍体肿瘤