二接合conjuation课件.pptVIP

（二）接合（conjugation） 定义：供体菌（“雄”）通过其性菌毛与受体菌（“雌”）相接触，前者传递不同长度的DNA给后者，并在后者细胞中进行双链化或进一步与核染色体发生交换、整合，从而使后者获得供体菌的遗传性状的现象，称为接合。 通过接合而获得新性状的受体细胞就是接合子（conjugant） 研究方法：1946年J.Lederberg等采用E.coli的两株营养缺陷型进行实验，奠定了方法学基础；也为以后的微生物遗传学提供了必要的条件。 存在范围： 细菌：G – 较为多见如E. coli、Salmonella、Shigella、Serratia、Vibrio 、Azotobacter 、Klebsiella和Pseudomonas等最为常见 放线菌：Streptomyces 、Nocardia 接合还可发生在不同属的菌种之间，如E. coli与Salmonella typhimurium之间或S. typhimurium与Shigella dysenteriae之间 E. coli的F因子：决定性别的质粒，属于附加体（episome），可以通过接合作用获得，也可以通过丫啶类化合物、溴化乙锭或丝裂霉素C的处理而消除。 研究细菌接合方法的基本原理 F因子的存在方式 F因子转导（F-duction）： 通过F’菌株与与F–菌株间的接合，就可以使后者转变成F’菌株，为次生F’菌株。它是一个部分双倍体，具有一个不完整的F因子，缺少部分基因，仍可进行与F–菌株间的接合。 由F’因子来传递供体基因的方式，称为F因子转导、性导（sexduction）或F因子媒介的转导（F-mediated transduction）。 接合的一般过程： 接合时F+细胞与F– 细胞相遇，性菌毛与F– 细胞表面发生吸附而形成接合管； F+细胞内，F因子的一条DNA单链在特定的位点上发生断裂； 断裂后的单链逐步解开，同时以另一条留存的环状单链做模板，通过模板的滚动，一方面把解开的单链以5’为先导通过性菌毛推入F– 细胞中，另一方面，在供体细胞内以滚动的环状模板重新合成一条互补的环状单链，以取代传递到F– 细胞中的那条单链。这种DNA复制机制称为滚环模型（rolling circle model）； 在F– 细胞中，以外来的供体DNA线状单链为模板合成一条互补单链，并随之恢复成环状双链F因子。 至此，原来的F– 菌株变成了F+ 菌株。原来的供体仍为F+ 菌株。 接合中断试验与染色体图： Hfr菌株与F– 菌株接合与F+ 菌株相似，区别在于F因子被分隔在核染色体组两端，F因子的头先进入受体细胞，然后是核染色体组，只有核染色体组完全进入受体细胞之后，F因子的尾才能进入受体菌细胞，完成DNA的传递。 Hfr菌株与F– 菌株的接合随时都可能被中断，所以极少出现转性的结果，而是形成各种各样的重组子。 接合中断试验：由Wollman和Jacob首创（1955），首先认识了原核微生物染色体的环状特性。 原理：接合试验的DNA转移过程存在着严格的顺序性，在接合进行中采用定时人为中断的方法，可以获得呈现不同数量 Hfr 性状的 F– 接合子，据此，可以选定几种有特定整合位点的 Hfr 菌株，使之与F–菌株进行接合，并在不同时间使其中断，最后，根据F–中出现Hfr菌株中各种形状的时间顺序（分钟），可以绘出较为完整的环状染色体图（chromosome map）。 到1983年E. coli染色体上已定位1027个基因。 接合中断试验 Hfr中F因子的整合、断裂和转移 * 接合——两个亲本细胞通过直接接触来转移遗传物质的基因重组方式。通过接合而获得新性状的受体细胞就是接合子（conjugant） 1946年用E.coli的两个营养缺陷型所作的实验： Met+bio+thr+leu+ Met-bio-thr+leu+ Met+bio+thr-leu- [Met.bio.thr.leu] [-] [-] [-] 混合培养 离心洗涤后 1、接合及其发现 A B A B [-] [-] 过滤器 U型管实验： 接合： 供体与受体细胞直接接触，借性菌毛传递DNA，在受体细胞中发生交换、整合，使之获得供体菌的遗传性状的现象，称为接合。通过接合而获得新性状的受体细胞就称接合子。 根据F因子在E. coli中的有无，及与染色体的关系，可将E. coli分为四种类型： ① F– （“雌性”）菌株： 细胞中不含有F因子， 细胞表面不具有有性纤毛。 可以通过与F+、F’或Hfr菌株接合而接受供体菌的F因子、 F’因子或Hfr菌株的部分或全部遗传信息，相应地可以转变成F+菌株、 F’菌株或重组子。 据估计，从自然界分离到的2000株E. coli中约有30%是F–菌株。 ② F+（“雄