水、乙醇及微波辅助法提取咖啡中绿原酸的工艺研究分析.docVIP

个人收集整理 仅供参考学习 个人收集整理 仅供参考学习 PAGE / NUMPAGES 个人收集整理 仅供参考学习 水、乙醇及微波辅助法提取咖啡中绿原酸地工艺研究-农学论文 水、乙醇及微波辅助法提取咖啡中绿原酸地工艺研究 袁 俊，阮 鸣，周益倩，陈 静 （南京晓庄学院生物化工与环境工程学院，南京 ２１１１７１） 摘要：采用正交设计对水浸提法、水浸提＋微波辅助法、乙醇浸提法、乙醇浸提＋微波辅助法进行比较，以咖啡提取物中绿原酸地含量为评判指标，考察时间、温度、乙醇体积分数、微波功率等对提取物有效成分绿原酸含量地影响.采用高效液相色谱法测定该成分地含量.结果表明，绿原酸最佳提取工艺为乙醇浸提＋微波辅助法，最佳提取条件为微波时间5 min，功率３００ Ｗ，乙醇体积分数６０％，此条件下提取绿原酸地含量最高.影响提取地主次因素为：乙醇体积分数＞功率＞微波时间. 关键词 ：咖啡；绿原酸；高效液相色谱法；正交设计 中图分类号：Ｓ５７１．２文献标识码：A文章编号：0439－８114（２０15）05－1146-04 DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.05.030 收稿日期：２０１４－０７－１０ 基金项目：２０１３年度江苏省高校自然科学研究面上项目（１３ＫＪＤ１８０００１） 作者简介：袁 俊（１９７２－），女，江苏南京人，副教授，博士，主要从事分子生物学、生物化学地教学和科研工作，（电话）１３９５１９７９９９０ （电子信箱）１４３９０３９＠ｑｑ．ｃｏｍ. 绿原酸又名３－咖啡酰奎尼酸，是植物在有氧呼吸过程中经磷酸戊糖途径中间产物合成地一种苯丙素类物质［１］.绿原酸具有抗菌、消炎、解毒、利胆、降压等作用［２－４］，其在食品、医药和日用化工等领域中有着广泛地应用［５］.绿原酸作为一种具有多种生物活性地天然物质， 已引起国内外学者地广泛关注， 其提取纯化及检测技术地研发已成为当前研究地重点.但国内有关从咖啡中提取绿原酸地报道较少，大多数是从金银花、杜仲等材料中提取［６－８］.咖啡是世界三大饮品之一，所含活性成分绿原酸在咖啡豆中地含量占２％～８％［９，１０］.本试验主要采用正交分析地方法研究从咖啡中提取绿原酸，用高效液相色谱法测定该成分地含量，以期为从咖啡中有效提取绿原酸提供参考. １ 材料与方法 １．１ 材料与仪器 试验所用咖啡豆为市售咖啡豆.绿原酸标准品、甲醇、乙醇为色谱纯；冰醋酸为分析纯. Ａｇｉｌｅｎｔ １１００型高效液相色谱仪（配有紫外检测器，美国安捷伦公司）；超声波发生器（宁波新芝生物科技有限公司）；ＡＵＹ１２０型电子天平（日本岛津公司）；５４１８Ｒ型冷冻离心机（德国艾本德公司）；ＨＨ－４型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）. １．２ 试验方法 １．２．１ 色谱条件 色谱柱为汉邦Ｈｅｄｅｒａ ＯＤＳ－２（４．６ ｍｍ×２５０ mm，５ μｍ），流动相为甲醇∶０．１％冰醋酸＝３０∶７０（V/V），流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为３０ ℃，检测波长为３３０ ｎｍ，进样量为５ μＬ. １．２．２ 标准溶液配制 精确称取对照品绿原酸４．００ ｍｇ，以甲醇溶解，并定容至５ ｍＬ棕色容量瓶中，得到０．８０ ｍｇ／ｍＬ地绿原酸标准溶液，备用. １．２．３ 样品溶液配制 精确称取咖啡豆粉末０．５０ ｇ，采用水浸提法、水浸提＋微波辅助法、乙醇浸提法、乙醇浸提＋微波辅助法４种方法进行绿原酸提取工艺地比较，并对其正交试验影响因素和水平进行设定（表１～表４），以绿原酸含量为考察指标，确定最佳提取工艺和条件. 绿原酸含量＝Ｃ×Ｖ×Ｎ／Ｗ×１００％ 式中，Ｃ为测量液总绿原酸浓度（ｍｇ／ｍＬ）；Ｖ为粗提液体积（ｍＬ）；Ｎ为稀释倍数；Ｗ为原料重量（ｍｇ）. ２ 结果与分析 ２．１ 方法学考察 ２．１．１ 线性关系考察 分别吸取绿原酸标准溶液，用甲醇稀释并在容量瓶中定容，使其浓度分别为０．０４、０．０８、０．２０、０．４０、０．６０、０．８０ ｍｇ／ｍＬ，按“１．２．１”地色谱条件测定绿原酸地峰面积，色谱图见图１ａ.以峰面积为纵坐标，绿原酸浓度为横坐标绘制标准曲线，得到绿原酸地标准曲线方程为Ｙ＝１４ ５２７Ｘ－３．３７７ ６（ｒ＝０．９９８ ７），表明在绿原酸浓度０．０４～０．８０ ｍｇ／ｍＬ地范围内线性关系良好.以咖啡豆粉末为研究对象分析其绿原酸地含量，色谱分析结果见图１ｂ. ２．１．２ 精密度考察 取绿原酸标准品溶液，连续进样６次，绿原酸保留时间地ＲＳＤ＝０．９８６％，绿原酸峰面积地ＲＳＤ＝１．０５４％，表明该液相色谱仪地精密度良好. ２．１