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微载体细胞培养 ——原理与方法 孙李靖 译 目 录 1 简介 1 1.1 使用微载体的原因 3 1.1.1 新机会和在动物细胞培养中的应用 5 1.1.2 提高生产能力 5 1.1.3 从分泌的产品中分离细胞 5 1.1.4 改进的控制 6 1.1.5 保护细胞抵抗物理和化学压力 6 1.1.6 减少对培养基的需求 6 1.1.7 减少劳动力需求 7 1.1.8 降低污染的风险 7 1.2 本书的目的 7 2 微载体背景 8 2.1 粘附（细胞－细胞之间，细胞－表面之间） 8 2.1.1 粘附到微载体上 12 2.2 固定化原则 15 2.3 材料 16 2.4 大小、形状和扩散限制 17 2.5 比重和沉降速率 18 2.6 刚性和剪切力 19 2.7 多孔性 19 2.8 细胞的观察 20 3 微载体技术 22 3.1 动物细胞培养用微载体的发展过程 22 3.2 微载体的优点 24 3.3 可能的缺点 25 3.4 放大需要考虑的事项 25 3.5 供应商的选择 27 4 应用 28 4.1 疫苗 28 4.1.1 病毒和载体的生产 30 4.2 天然和重组蛋白 32 4.2.1 在不同的反应器中比较微载体培养（填充床或者流化床反应器） 33 4.2.2 灌注大孔微载体的长期生产 33 4.2.3 大孔微载体灌注培养的过程稳定性 34 4.3 单克隆抗体 35 4.3.1 不同过程的抗 HIV 单克隆抗体的产量比较 36 4.3.2 中空纤维反应器和流化床反应器的比较 37 4.4 潜在的未来应用 37 4.5 应用前景 39 4.5.1 大量细胞生产 39 4.5.2 研究细胞功能，代谢和分化 40 4.5.3 无蛋白裂解酶的移种和细胞转移 43 4.5.4 显微镜方法 44 4.5.5 收获有丝分裂的细胞 53 4.6 选用哪种微载体 54 4.6.1 决策树 54 4.6.2 选择 Cytodex 微载体的更多讨论 58 5 微载体产品 60 5.1 Cytodex 微载体 60 5.1.1 Cytodex 1 60 5.1.2 Cytodex 3 61 5.1.3 在 Cytodex 微载体上培养的细胞类型 63 5.2 Cytopore 微载体 67 5.2.1 在 Cytopore 上培养的细胞类型 69 5.3 Cytoline 微载体 69 5.3.1 在 Cytoline 上培养的细胞类型 71 6. 微载体培养设备 73 6.1 程序的一般要点 73 6.2 必要条件 74 6.2.1 培养容器的硅化 74 6.3 单元处理系统 74 6.4 小规模设备 75 6.4.1 旋转瓶和磁力搅拌容器 75 6.4.2 滚瓶 77 6.4.3 摇摆瓶 79 6.4.4 气升式和液升式培养系统 79 6.4.5 小规模灌注培养 80 6.4.6 培养皿，培养管和多孔板 80 6.4.7 小规模发酵罐 81 6.5 大规模设备（培养容器） 82 6.5.1 大规模搅拌釜微载体培养容器 82 6.5.2 填充床 83 6.5.3 流化床 84 外部循环的流化床 84 Cytopilot－内部循环流化床 84 流化和流化速度 85 6.6 保留系统 86 6.6.1 旋转过滤器 86 6.6.2 沉降器 87 6.6.3 超声装置 88 6.6.4 中空纤维 88 6.6.5 离心机 89 7. 培养条件 90 7.1 培养基和组分 90 7.1.1 培养基的选择 90 培养基的总体评价 92 培养基的使用方面 92 氨基酸 92 核酸前体 94 碳源和乳酸 94 维生素和胆碱 95 聚合物 95 血清在培养基中的用途 95 血清的选择和浓度 96 0 降低血清浓度 97 1 更换为其它类型的血清 98 2 混合不同的血清 98 3 培养周期的不同阶段使用不同的血清 99 4 血清的差异 99 7.1.2 无血清培养基 100 添加剂100 7.1.3 无蛋白培养基 102 7.2 气体供应 102 7.2.1 微载体培养中的气体供应和交换 103 7.2.2 氧气 104 7.2.3 二氧