基于PCR和位点特异性引物延伸反应的SNP检测方法的建立-新医学.PDF

·530 · 检验医学 2018 年 6 月第 33 卷第 6 期 Laboratory Medicine ，June 2018 ，Vol. 33 ，No. 6 文章编号 ：1673-8640 （2018 ）06-0530-06 中图分类号：R446.1 文献标志码 ：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2018.06.015 基于PCR 和位点特异性引物延伸反应的SNP 检测方法的建立 1 2 单洪波 ，金亚南 （1. 杭州艾迪康医学检验中心，浙江 杭州 310023 ； 2. 杭州优思达生物技术有限公司，浙江 杭州 310053 ） 摘要：目的 建立一种基于聚合酶链反应（PCR ）、位点特异性引物延伸反应（ASE ）和核酸试纸条检测 技术的单核苷酸多态性（SNP ）检测方法。方法 先通过PCR对包含SNP位点的特异基因序列进行扩增；然后 通过带有A标记的ASE引物针对SNP位点的不同基因类型进行特异性延伸；延伸后的产物可以与B标记的探针 进行杂交结合，形成同时携带A和B标记的杂交产物；而该杂交产物可以通过核酸试纸条进行目视化检测，从 而完成对SNP基因型的检测。结果 通过对 10倍浓度梯度稀释的人类基因组DNA进行检测，PCR-ASE 的检测 敏感性为88 ng/反应；通过在同一条核酸试纸条上针对同一SNP位点2种不同基因型的检测，达到了多重检测的 目的；PCR-ASE对 19名志愿者的5个不同SNP位点的检测结果与基因测序法完全一致。结论 PCR-ASE 是一种 简单、准确的SNP基因型检测方法。 关键词：引物特异性延伸反应；单核苷酸多态性；核酸试纸条检测技术 Establishment of PCR and ASE-based detection for SNP SHAN Hongbo1 2 ，JIN Yanan . （1. Adicon Clinical Laboratories ，Hangzhou 310023 ，Zhejiang ，China；2. Ustar Biotechnologies （Hangzhou ） Ltd. ，Hangzhou 310053，Zhejiang ，China） Abstract ：Objective To establish polymerase chain reaction （PCR ），allele-specific extension （ASE ） and nucleic acid detection strip-based detection for single nucleotide polymorphisms （SNP）. Methods The specific gene sequence containing SNP sites was amplified by PCR. For each SNP site ，ASE primers labeled with A were extended. The ASE reaction products can bind to probe labeled with B ，and hybridization products containing A and B simultaneously were formed. The products can be detected by disposable amplicon cross-contamination proof device containing a nucleic acid detection strip ，and the detection of SNP genotypes can be accomplished. Results Ten-fold serial di