铁皮石斛可溶性酸性转化酶基因克隆与表达分析-学报编辑部-华南.PDF

　华南农业大学学报　２０１７，３８（２）：８１８５ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　　　　　　　　　　 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１７．０２．０１５　 孟衡玲，张　薇，卢丙越，等．铁皮石斛可溶性酸性转化酶基因克隆与表达分析［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１７，３８（２）：８１８５． 铁皮石斛可溶性酸性转化酶基因克隆与表达分析 孟衡玲，张　薇，卢丙越，苏一兰，薛春丽 （云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室／红河学院生命科学与技术学院，云南 蒙自６６１１００） 摘要：【目的】克隆铁皮石斛Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ可溶性酸性转化酶基因ＳＡＩ，分析该基因生物学信息及时空表达特 异性。【方法】基于同源序列克隆铁皮石斛ＳＡＩ基因ｃＤＮＡ全长，采用生物信息学方法进行序列分析，并采用ｑＲＴ ＰＣＲ进行组织特异性表达分析。【结果】铁皮石斛ＳＡＩ基因全长为１５９５ｂｐ，ｃＤＮＡ编码区１３６８ｂｐ，Ｇｅｎｂａｎｋ登录号 为ＫＵ５９８８５２。该基因编码４５５个氨基酸，蛋白相对分子质量为５０７００。ＮＣＢＩＢＬＡＳＴｘ分析表明，该基因氨基酸序 列与柑橘Ｃｉｔｒｕｓｕｎｓｈｉｕ酸性转化酶基因、甜橙Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ酸性 呋喃果糖苷酶基因序列相似性最高，达７７％，与其他 β 植物酸性转化酶基因的相似性均高于６８％。聚类分析表明，铁皮石斛ＳＡＩ基因与玉米Ｚｅａｍａｙｓ液泡转化酶基因、 甘蔗ＳａｃｃｈａｒｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍＳＡＩ基因亲缘关系最近。该基因编码的蛋白质属于非跨膜结构的亲水性热稳定蛋白，定 位于液泡中。ＳＡＩ基因在２年生铁皮石斛的茎中表达量最高，３年生的叶中表达量最低。【结论】成功克隆铁皮石 斛液泡酸性转化酶基因，该基因在铁皮石斛不同组织不同生育时期的表达量差异较大。 关键词：铁皮石斛；酸性转化酶；基因克隆；实时荧光定量ＰＣＲ 中图分类号：Ｓ８２８　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１７）０２００８１０５ Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｏｌｕｂｌｅａｃｉｄｉｎｖｅｒｔａｓｅ ｇｅｎｅｆｒｏｍＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ ＭＥＮＧＨｅｎｇｌｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＷｅｉ，ＬＵＢｉｎｇｙｕｅ，ＳＵＹｉｌａｎ，ＸＵＥＣｈｕｎｌｉ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｉｇｈＱｕａｌｉｔｙＣｒｏｐｓＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄＳａｆｅｔｙＣｏｎｔｒｏｌ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅ ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｏｎｇｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｅｎｇｚｉ６６１１００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏｃｌｏｎｅｓｏｌｕｂｌｅａｃｉｄｉｎｖｅｒｔａｓｅ（ＳＡＩ）ｇｅｎｅｉｎＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ，ａｎｄｐｅｒｆｏｒｍ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎｄｓｐａｔｉｏｔｅｍｐｏｒａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆＳＡＩｇｅｎｅｉｎＤ． ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｔｏｏｌｓ，ａｎｄｔｈｅｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇｑＲＴＰＣＲ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈＳＡＩ ｇｅｎｅｉｎＤ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅｉｓ１５９５ｂｐ，ｔｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃ