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GB /T4789.9-2008 食品微生物学检验空肠弯曲菌检验 空 肠 弯 曲 菌 简 介 空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni ），革兰氏阴性菌，弯曲菌属。菌体轻度弯曲似逗点状，长1.5～5 μm,宽0.2～0.8 μm。菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。 沙门氏菌属的生物学特性 培养特性： 微需氧菌，在含2.5～5%氧和10%CO2的环境中生长最好。最适温度为37～42℃。在正常大气或无氧环境中均不能生长 Skirrow琼脂平板上： 42±1℃微需氧培养48±2h，一种可疑菌落为灰色、湿润、扁平、有光泽、呈沿接种线向外扩散生长倾向；另一种可疑菌落为分散突起的单个菌落，其菌落大小一般为1～2mm，边缘整齐，发亮。 mCCD琼脂平板上：42±1℃微需氧培养48±2h，其菌落大小一般为1～2mm，光泽、潮湿、扁平、呈扩散生长倾向 血平板上：灰色菌落。 生化特性： 空肠弯曲菌氧化酶试验阳性，过氧化氢酶试验阳性，马尿酸钠水解试验阳性，吲哚乙酸酯水解试验阳性。 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌 microbiologial examination of food hygiene —examination of campylobacter jejuni 2008-11-21发布 2009-03-01实施 中华人民共和国卫生部 发布 本标准规定了食品中空肠弯曲菌（Salmonella ）的检验方法。 本标准适用于食品中空肠弯曲菌的检验。 范 围 操 作 步 骤 1、前增菌 在选择性增菌培养基Preston肉汤接种空肠弯曲菌，在微需氧条件下，42℃±1℃震荡（25-100r/min）或静止培养24h±2h。 2、分离培养 2.1、增菌液接种 将24h增菌液分别划线接种Skirrow与mCCD琼脂平板上，微需氧条件下42℃±1℃静止培养48h±2h。 2.2、可疑菌落筛选 Skirrow琼脂平板：灰色、湿润、扁平、有光泽、呈沿接种线向外扩散生长倾向，其菌落大小一般为1～2mm mCCD琼脂平板：光泽、潮湿、扁平、呈扩散生长倾向，其菌落大小一般为1～2mm。 操 作 步 骤 3、鉴定 空肠弯曲菌的形态和生化鉴定 接种哥伦比亚血平板，微需氧条件下42℃±1℃静止培养48h±2h 3.1 进行革兰氏染色 3.2 氧化酶试验 3.3 过氧化氢酶试验 3.4 马尿酸盐水解试验（接菌量大） 3.5 吲哚乙酸酯水解试验（接菌量大） 样品处理 Preston肉汤增菌 42℃±1℃ ， 24h±2h 微需氧条件 空肠弯曲菌检验程序 接种Skirrow与mCCD琼脂平板 挑取可疑菌落，接种哥伦比亚或MH血琼脂平板 42℃±1℃ ， 48h±2h 微需氧条件 革兰氏染色、形态观察 氧化酶 试验 过氧化氢酶 试验 马尿酸钠 水解试验 吲哚乙酸酯 水解试验 PCR鉴定 （可选） 报 告 1、细菌形态观察 对可疑菌落进行革兰氏染色，复染时使用 0.5%的苯酚品红溶液。弯曲菌为革兰氏阴性，菌体弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时呈 S 形、螺旋状或海鸥展翅状。 2、氧化酶试验 使用无菌棉签蘸取可疑菌落，将氧化酶试剂直接滴加到沾有菌的棉签上，如果在 10 s 内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性。弯曲菌属为阳性。 鉴定过程 鉴定过程 3、过氧化氢酶试验 挑取菌落，加到干净玻片上的 3％过氧化氢溶液中，如果在 30 s 内出现气泡则判定结果为阳性。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和海鸥弯曲菌为阳性。 鉴定过程 4、马尿酸盐水解试验 挑取菌落（菌量要大），加到盛有 0.4 mL 1％马尿酸钠的试管中制成菌悬液。混合均匀后在 36 ℃水浴中温育 2 h 或 36 ℃培养箱中温育 4 h。沿着试管壁缓缓加入 0.2 mL 茚三酮溶液，不要振荡，在 36 ℃的水浴或培养箱中再温育 10 min后判读结果。若出现深紫色则为阳性；若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。 鉴定过程 5、吲哚乙酸酯水解试验 挑取菌落（菌量要大）至羟基吲哚醋酸盐纸片上，再滴加一滴灭菌蒸馏水。如果吲哚乙酸脂水解，则在 5 min～10 min 内出现深蓝色；若无颜色变化则表示没有发生水解。(10min之内观察，否则会出现假阳性结果) 弯曲菌的鉴定 特征 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 海鸥弯曲菌 乌普萨拉弯曲菌 过氧化氢酶试验 + + + -或微弱 马尿酸盐水解试验 + - - - 吲哚乙酸酯水解试验 + + - + 综合以上生化实验的结果，报告25g（ml）样品中检出或未