SPF级近交系Wistar大鼠血常规测定及性别和年龄对其影响的研究.docVIP

H22实体瘤小鼠的免疫功能指标及环磷酰胺的影响 饶子亮，郑佳琳，黄威，王诺，钟志勇，邝少松，唐小江 （广东省医学实验动物中心，佛山 528248） 摘要： 目的 规范化测定H22实体瘤小鼠的免疫功能指标及环磷酰胺的影响。方法 将H22肝癌腹水瘤细胞接种于BALB/c小鼠左侧腋窝皮下，第二天随机分成4组：荷瘤小鼠+环磷酰胺组、荷瘤小鼠组、正常小鼠+环磷酰胺组、正常小鼠组。观察小鼠一般临床表现、成瘤情况、体质量、摄食量、肿瘤体积、肿瘤质量、免疫脏器质量、血常规值、血生化值、细胞因子、淋巴细胞转化、NK细胞活性、淋巴细胞亚群分类及组织病理。结果 与正常小鼠比较，H22荷瘤小鼠平均摄食量降低，RBC、HGB、HCT显著性降低（P0.01），WBC、PLT、RDW显著性升高（P0.01），GOT、GPT显著性升高（P0.01），CD4-CD8-显著性降低（P0.01）。荷瘤小鼠给予环磷酰胺后平均摄食量降低，D9~D14体质量显著性降低（P0.05），D5~D14肿瘤体积显著性降低（P0.01），肿瘤质量、脾质量、胸腺质量显著性降低(p0.01)，WBC、MCV显著降低（P0.01），HGB、MCH、MCHC、PLT显著增加（P0.05），GOT、GPT显著降低（P0.01），IL-2显著降低（P0.01），IFN-γ显著增加（P0.01），CD4+CD8-(%)、CD4+CD8+ (%)、CD4-CD8+(%)、CD3+(%)淋巴细胞显著增加（P0.01），CD4-CD8-(%)淋巴细胞显著降低（P0.01），脾淋巴细胞转化吸光度差值显著降低（p0.05），NK细胞活性显著降低（P0.05）。结论 本文全面测定了H22肝癌实体瘤小鼠的血液指标和免疫功能指标，为生物反应调节剂抗肿瘤药物筛选提供了基础数据。 关键词： H22肝癌；实体瘤；免疫功能指标；环磷酰胺 中图分类号：R332 文献标识码：A 文章编号： 建立理想的肿瘤动物模型是研究恶性肿瘤发生、发展、转移及疗效评价的重要手段，移植性肿瘤模型因操作简便、易于观察,得到了广泛的认可。小鼠腹水型肝癌(H22)瘤株可在多种品系小鼠身上移植生长，常用于腹水瘤研究[1、2]。本实验采用H22肝癌细胞接种小鼠皮下,制作实体瘤肿瘤模型。该方法近年来在肝癌研究中被广泛运用,具有造模稳定、实验周期短，便于测量和观察肿瘤的生长速度、宿主的生存质量和存活时间等特点[3]。本文全面测定了该模型的免疫功能指标，为研究肿瘤与免疫系统的关系提供基础数据。 材料和方法 1.1实验动物的选择和饲养环境 收稿日期：2013-01-25 基金项目：广东省科技计划项目（2012B060300021）、广东省科技计划项目（2012B050500006）。 作者简介：饶子亮(1983- )，男，实验师，从事肿瘤动物模型与抗肿瘤药物筛选研究。 通讯作者：唐小江(1967- )，男，主任医师、博士、博士生导师，主要从事毒理学、实验动物与动物实验、药物与药理学研究， Email: HYPERLINK mailto:river-t@126.com river-t@126.com BALB/c小鼠，SPF级，雄性48只，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：0063778。小鼠饲养于广东省医学实验动物中心SPF级实验室中，屏障设施合格证：SYXK（粤）2008-0002，自由进食和饮水。温度20℃～26℃，相对湿度在40%～70%，12h昼夜交替照明，换气次数20～50次/h。所用饮水、垫料均经132℃，10min高压蒸汽灭菌；饲料为本中心配制加工的全价颗粒饲料，经辐照灭菌。本研究方案经过广东省医学实验动物中心伦理委员会审查通过。 1.2细胞 小鼠肝癌细胞H22，由广东省医学实验动物中心细胞库提供。 1.3实验仪器及试剂 1.3.1主要实验仪器：流式细胞仪，美国BD公司，型号：FACSAria；酶标仪：美国BIO-TEX，型号：ELX800；全自动生化分析仪：意大利LOGOTECH公司，ECHO LCD；全自动血球计数仪，日本光电公司，MeK 7222K。 1.3.2主要试剂：注射用环磷酰胺，上海华联制药公司生产，批号：031113；IL-2 ELISA试剂盒，深圳市达科为生物技术有限公司生产，批号：E2020-10-01；IFN-Y ELISA试剂盒，深圳市达科为生物技术有限公司生产，批号：E2000-10-01； FITC anti-mouse CD3，Biolegend公司，批号：B24867；PE anti-mouse CD4，Biolegend公司，批号：B24811；APC anti-mouse CD8a，Biolegend公司，批号：B25129。 1.4实验方法 1.4.1 制作H22实体瘤小鼠：将液