适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法-南京林业大学学报.PDF

第４１卷　 第３期 南京林业大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．４１，Ｎｏ．３ ２０１７年５月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｙ，２０１７ － ＤＯＩ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００ ２００６．２０１７．２０１６０４０４７ 适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法 １，２ ２，３ ２ ２ １，２ 施大伟 ，何　 梅 ，梁霏霏 ，徐　 鸣 ，谢寅峰 （１． 南方现代林业协同创新中心，江苏　 南京　 ２１００３７；２． 南京林业大学生物与环境学院， 江苏　 南京　 ２１００３７；３． 江西省林业科学院，江西　 南昌　 ３１００３２） 摘要：【目的】获得银杏叶绿体蛋白质的提取方法，在蛋白质水平探讨银杏光合作用对环境的响应机制。 【方法】 － 建立一种适合银杏叶绿体蛋白双向电泳分离的实验体系，采用Ｔｒｉｓ 平衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提 － 取，并与三氯乙酸（ＴＣＡ） 丙酮沉降法进行对比分析。 【结果】Ｐｅｒｃｏｌｌ 密度梯度离心法适用于银杏叶绿体的提 － － 取，提取的叶绿体平均完整率在８５％左右。 单向电泳结果显示，与ＴＣＡ 丙酮沉降法相比，在用Ｔｒｉｓ 平衡酚抽提 － 法分离的叶绿体蛋白质泳道中，低分子质量蛋白质条带更多、更清晰。 进一步的双向电泳结果表明，用Ｔｒｉｓ 平 衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提取，蛋白质产量更高，图谱清晰，所分离的蛋白点更多，形态更好，条纹影 － 响相对较小。 【结论】Ｔｒｉｓ 平衡酚抽提法可有效地提取高质量的叶绿体蛋白质并进行双向电泳，可用于银杏叶 绿体的蛋白质组学分析。 关键词：银杏；叶绿体蛋白质组；蛋白质提取方法；双向电泳 － － － 中图分类号：Ｓ７１８．３　 　 　 　 　 　 　 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００ ２００６（２０１７）０３ ００５１ ０６ Ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｇｉｎｋｇｏ ｐｌａｎｔｓ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｆｏｒ ｔｗｏ⁃ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １，２ ２，３ ２ ２ １，２ ＳＨＩ Ｄａｗｅｉ ，ＨＥ Ｍｅｉ ，ＬＩＡＮＧ Ｆｅｉｆｅｉ ，ＸＵ Ｍｉｎｇ ，ＸＩＥ Ｙｉｎｆｅｎｇ （１． Ｃｏ⁃Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈ