菊粉酶酶源菌株筛选及其基因克隆-微生物学报.PDF

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! .’ ) # 年 月 $$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,- $$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 菊粉酶酶源菌株筛选及其基因克隆 张苓花 王运吉 叶淑红 张福琪 （大连轻工业学院 食品科学与生物工程系 大连 //%$$/） 摘 要：筛选出一株产菊粉酶酶源菌株 ，鉴定为黑曲霉（ ）。 扩增 56/$ !#$%’(() *’$% 789 56/$ 的内切菊粉酶基因’*)5/ 并进行核苷酸序列分析。结果表明 ’*)5/ 全长 /11/:;，没有内含 子，所编码的氨基酸序列中，存在 个潜在的 糖基化位点，其中存在菊粉酶的保守序列 ! .4 =.7.。以;?8//@ 为克隆载体，以+ ) ,-(’ *=/$0 为受体菌株，获得菌粉酶基因克隆。 关键词：黑曲霉，菊粉酶，基因克隆 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） A@/ 5 $$$/4%$0 $$ $#4$#/4$1 ［，］ / 菊粉酶（ ）可分为两类 ，一类是内切菊粉酶（ ， B,+(C,DE- ’F B,+(DE- ,G’C,+(C,DE- 8 # ) ) /)2 ），主要水解产物是寡聚糖；另一类为外切菊粉酶（ ， ），水解 H’C,+(C,DE- 8 # ) ) /) @$ 产物主要是果糖。菊粉酶广泛存在于植物和微生物中。利用菊粉酶水解菊粉生产寡聚果 糖或超高果糖浆，具有巨大的工业应用潜力。野生型微生物菊粉酶表达量比较低，利用基 因工程技术构建菊粉酶基因工程菌，有望提高菊粉酶的表达量。国外已报道了来源于节 杆菌（ ）、克鲁维酵母（ ）、青霉（ ）、黑曲霉（ !%./%-01,.$% E; ) 2()34$%-53,$ 6$*’,’((’)5 !#$%’(() ［ ］ # I % ）及无花果曲霉（ ）等内切菊粉酶基因的分子克隆 。本文报道菊粉 *’$% !#$%’(() 7 ’,))5 酶酶源菌株的筛选及其内切菊粉酶基因的克隆和序列分析。 ! 材料和方法 ! ! 菊粉酶产生菌分离样品 菊芋根部土壤。 !# 菊芋 采自野生菊芋。 !$ 培养基 初筛培养基：菊粉 ，蛋白胨 ，酵母膏 ，琼脂 ，定容至 。（菊粉单独灭 !$ ! $J /$J /$J $J /K 菌，加入已熔化并冷却到1$ L 的琼脂培养基中，混匀制平