基改作物之转殖基因在环境中之侦测技术.PDF

基改作物之轉殖基因在環境中之偵測技術 1 2 3 羅致逑 、陳淑娟 、楊金忠 1 行政院農委會農業藥物毒物試驗所研究員/ / lcc@tactri.gov.tw 2 行政院農委會農業藥物毒物試驗所 專業助理/ / jean@tactri.gov.tw 3 行政院農委會農業藥物毒物試驗所 專業助理/ / yangjz@tactri.gov.tw 摘要 對基改植物中使用抗藥性基因的安全爭議，世界衛生組織與世界農糧組織建議各國 對抗藥性基因的水平移轉至環境中病原性微生物，及可能在臨床上的意義要加以評估 的。歐盟的建議則為各會員國在審查 GMO含可抗人畜用抗生素基因時要特別注意環境 影響的評估。基改木瓜為台灣第一個發展成功的轉基因作物，其轉入之基因為抗輪點病 毒的 PRSV CP 基因與抗卡那黴素的 nptII 基因，因此本研究目的有二：(1) 建立抗藥性 轉殖基因在環境中水平移轉的偵測技術； (2) 建立轉殖基因在環境中殘留分析之技術。 研究結果顯示基改木瓜染色體上之抗藥性基因 ntpII 之水平移轉可以不動桿菌 Acinetobacter sp. BD413 （pFG4ΔnptII ）是否完成轉型（轉形菌）的方法來偵測，偵測極 -10 限為 10 轉形菌， DNA量為 0.4μg 。基改木瓜轉殖基因在土中之殘留量可以 CTAB/SDS/gel 方法萃取土壤總DNA ，再以同步定量聚合酶連鎖反應（Real-time PCR ） 來分析，偵測極限為 0.3ng DNA/每克土。基改木瓜在土中之殘存期可在 5個月以上。 關鍵詞 ：基因水平移轉（Horizontal Gene Transfer ）、不動桿菌（Acinetobacter sp. BD413 ，pFG4ΔnptII ）、同步定量聚合酶連鎖反應（Real-time PCR ）。 6-1-1 一、 前言 對基改植物中使用抗藥性基因的安全爭議，世界衛生組織與世界農糧組織建議各國 對抗藥性基因的水平移轉至環境中病原性微生物，及可能在臨床上的意義要加以評估 的。歐盟的建議則為各會員國在審查 GMO含可抗人畜用抗生素基因時要特別注意環境 影響的評估。基改作物選擇性的標示基因最常用的為 nptII 之抗藥性基因。因此這抗藥 性基因會不會移轉至其他土壤微生物造成族群生態的優勢，是必須要了解的。 轉基因在土壤中之殘留有可能為微生物吸收利用，因此對於轉基因在土壤中殘留的 監控為環境安全評估項目之一，本研究為建立偵測土壤轉基因分析的方法，以進一步了 解基因的流佈及對生態的影響與衝擊評估。 二、 材料與方法 1 、基改木瓜基因構築及PCR 分析位置由中興大學葉錫東教授提供( )[1] +1+1 2525 372372 385385 1569156925212521339233924499449954205420 RBRB NOS-PNOS-P nptnpt IIII NOS-tNOS-t 35S-P35S-P PR SV CPPR SV CP NOS-tNOS-t LBLB 200200 398398 769769 102102 713713 圖 1 、基改木瓜基因構築(18-2-4)及 PCR 分析區段 102 bp ，200