基于液相色谱-质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究-药物分析学专业论文.docxVIP

4 4 本 章 小 结 4 3 参 考 文 献 4 5 第 三 章 综 述 ：流 动 相 中 的 添 加 剂 对 L C - E S I/M S 离 子 化 的 影 响 4 9 1 . 弓丨W 4 9 2 . 电喷 雾 离 子 化 的 过 程 4 9 3 . 流 动 相 中 的 添 加 剂 50 3 .1 . p H 5 1 3 .2 . 添 加 剂 的 浓 度 52 3 .3 . 离 子 对 试 剂 5 3 3 .4 . 加 合 物 的 形 成 5 3 3 .5 . 加 合 物 形 成 对 紫 杉 烷 类 定 量 分 析 的 影 响 5 5 参 考 文 献 56 附 录 攻 读 硕 士 学 位 期 间 以第 一 作 者 撰 写 的 论 文 6 4 g t 6 5 3 基 于 基 于 液 相 色 谱-质 谱 联 用 技 术 的紫 杉 醇 分 析 方 法 及 其 临床 应 用 的研 究 摘 要 紫 杉 醇 是 临床 上 常用 的紫 杉 烷 类 抗 癌 药 物 。然 而 ，紫 杉 烷 类 药 物 具 有 强 疏 水 性 ， 临 床 使 用 时 需 用 多种 药 用 溶 媒 增 溶 ，使 药 物 的疗 效 和 安 全 性 受 到 影 响 。 开 发 高效 低 毒 的紫 杉 醇 新 型 制 剂 已成 为 近 年 来 国 内外 研 究 的热 点 ， 由此 也 引 发 了对 于 紫 杉 醇 在 定 性 、定 量 测 定 以及 代 谢 物 分 析 等 方 面 的各 种 需 求 。 本 课 题 分 别 以 液 相 色 谱 -质 谱 联 用 （L C -M S ) 和 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 (L C -M S /M S ) 为 技 术 平 台 ，对 人 血 浆 中紫 杉 醇 的 分 析 方 法 进 行 了研 究 。经 方 法 优 化 ， 建 立 了灵 敏 度 高 、特 异 性 好 的 定 量 分 析 方 法 ， 并 进 行 了方 法 验 证 。 L C -M S 法釆 用 液液萃 取 法进 行 血 浆 样 品预 处 理 ，提 取液 为叔 丁 基 甲醚 ， 内标 选用炔诺酮 。色谱柱 为 Z orbax SB -C ig 柱 （100 m m x 2.1 m m ,3.5 (im ,A gilent) ，流 动 相 为 甲醇 - 0 .2 m m ol/L 甲酸 铵 溶 液 （包 含 0 .1% 甲酸 ），梯 度 洗 脱 。在 E S r 源 正 离 子模式下 ，选择离子监测 （SIM ) 的 目标离子为紫杉醇的[M +N a]+ w 々876.5 和 内标 的[M +H ]+ w /z 299.4 。方法学验证表 明本方法 的灵敏度高、特异性好 ，线性范围是 1.0-400 ng/m L (r 0.998), 最低定量 限为 1.0 ng/m L ，无 明显基质效应 ，方法 的 日 内和 日 间 精 密 度 都 小 于 8 .8% ， 准 确 度 在 ±6 .8% 以 内 ， 可 以满 足 药 代 动 力 学 研 究 的 要 求 。此 方 法 已成 功 应 用 于 紫 杉 醇 脂 质 体 注 射 液 在 患 者 体 内 的药 动 学 研 究 。 L C -M S/M S 法定量方法 中 内标选用 多西紫杉醇 ，色谱柱为Shim pack X R -O D S 柱 （75 m m x 3.0 m m ,2.2 pm ，Shim adzu)，流动相 为 甲醇 ：1.0 m m ol/L 甲酸铵 溶液 (73/27,v/v), 等度洗脱 。在E SI源正离子模式下 ，多反应监测 （M R M ) 的离子对为 紫杉醇m /z 854.2—286.1和 内标 m /z 808.2—226.0 。线性范 围是0.5-500 ng/m L , 方法 的 日 内和 日间 精 密 度 都 小 于 7 .5% ， 准 确 度 在 ±3 .6 % 以 内 。 该 方 法 血 浆 用 量 少 （5 0 (xL ) ，灵敏度高 ，最低定量限达0.5 ng/m L ，分析周期为4 m in ，适用于快速 以及大 样 本 量 的分 析 ，并在 注 射 用 紫 杉 醇 聚 合 物 胶 束 的 一 期 临床 试 验 中取 得 满 意 的 结 果 。 研 究 中对 色 谱 和 质 谱 条件 进 行 了细 致优 化 ，并 且 通 过 在 溶 液 中加 入 不 同 的添 加 剂研 究 紫 杉 醇 的 离 子 化 方式 以及 加 合 物 离 子 的形 成 ，有 助 于 提 高 紫 杉 醇 的 离 子 化 效 率 和 质 谱 响 应 的 稳 定 性 ，满 足 痕 量 测 定 的 需 求 。 通 过 系 统 研 究 紫 杉 醇 在 电喷 雾 一 级 质 谱 的 电离 规