医学免疫学实验三ELISA双抗体夹心法检测癌胚抗原.pptxVIP

实验三 ELISA双抗体夹心法检测癌胚抗原 1、 学习并熟悉双夹心ELISA方法 能够了解双夹心ELISA方法的基本原理和操作步骤，重点是抗原—抗体复合物的形成。 2、完成该方法的应用 能够按照实验步骤正确操作后得到最终结果，理解该方法的实验应用和意义。 3、掌握实验结果分析 能够依据实验结果正确分析样品，并总结实验过程中的注意事项。 什么是癌胚抗原（CEA）？ 辅助诊断 CEA最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。正常人群CEA水平低于5ng/mL。在多种癌症当中（如大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌等）可见CEA升高。但CEA升高并不代表患癌，因为吸烟、妊娠期或其他疾病也可以引起CEA升高。所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在临床诊断上只有参考价值。 区别良/恶性肿瘤 虽然CEA升高无早期诊断价值，但对鉴别良性与恶性肿瘤有重要提示。 直接法 间接法 竞争法 ELISPOT 双抗体夹心法 1 2 3 4 抗体（一抗）的包被 CEA抗体（一抗）溶于碳酸盐缓冲液中，被吸附在固相载体（聚苯乙烯等）表面；之后用富含蛋白的封闭液将没有吸附抗体的表面封闭。 抗原-抗体复合物的形成 在适当温度及充分反应时间的条件下，样品中游离的抗原会被固相载体表面的抗体捕获。 酶标抗体（二抗）的结合 带有偶联酶的抗体一方面可以识别并结合CEA抗原的另外