医学免疫学实验二对流免疫电泳.pptVIP

实验二 对流免疫电泳 大学基础医学院免疫学系 实验原理 对流免疫电泳(Counter Immunoelectrophoresis，CIEP)又称免疫电渗电泳，是双向琼脂扩散与电泳分析的结合产物。在PH8.6的缓冲液中，一般蛋白质抗原带负电荷，向正极泳动。抗体因等电点较高，只带微弱负电；同时由于抗体分子量较大，在离子琼脂中泳动慢，受电渗作用的影响而向负极移动。在电场作用下，抗原、抗体定向泳动，在其相遇的最佳比例处形成乳白色沉淀线。 ●双向琼脂扩散: 将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在二者比例合适处形成白色沉淀线。 琼脂扩散技术 Ag Ag Ag Ag 琼脂中含抗体 ●单向琼脂扩散: 将一定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔并加入抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比，故该试验是定量试验。 带电颗粒在电场作用下，向 着与其电性相反的电极移动。 影响电泳迁移速度的因素： 1、带电颗粒的性质：电荷多、分子小?泳动快 2、溶液中pH值： pH值离pI越远，解离多，电荷多?泳动快 3、电渗作用 4、溶液的离子强度：低离子强度时，迁移速度快 5、电场强度：单位厘米的电位差 越大?泳动快 6、吸附作用：介质对样品的滞留作用?拖尾 ? 电泳 等电点：在某一pH的溶液中，氨基酸