22、第二十二章 基因结构与功能分析.pptVIP

3. 用原位杂交进行RNA区域定位 原位杂交（ISH）是通过设计与目标RNA碱基序列互补的寡核苷酸探针，利用杂交原理在组织原位检测RNA的技术，其可对细胞或组织中原位表达的RNA进行区域定位，同时也可作为定量分析的补充。 （二）用PCR技术检测RNA表达水平 1. 用逆转录PCR进行RNA的半定量分析 逆转录PCR（RT-PCR）一般用于RNA的定性分析；如果设置阳性参照，则可对待测RNA样品进行半定量分析。 2. 用实时定量PCR进行RNA的定量分析 实时定量PCR是定量分析RNA的最通用、最快速、最简便的方法，该方法是对PCR反应进行实时监测，具有很高的灵敏度和特异性。 （三）用基因芯片和高通量测序技术分析RNA表达水平 1. 基因芯片已成为基因表达谱分析的常用方法 基因芯片主要采用cDNA芯片，其便于对不同状态下的基因表达谱进行比较，揭示转录组差异表达的规律，对探索发病机制、评价治疗效果、筛选药物靶标具有重要意义。 2. 用循环芯片测序技术分析基因表达谱 运用循环芯片测序技术，可对基因表达谱进行高通量分析，一次可完成几十万到几百万个DNA分子片段的序列测定，从而快速获得转录组或基因组的全貌。 二、通过检测蛋白质/多肽而在翻译水平分析基因表达 （一）用蛋白质印迹技术检测蛋白质/多肽 （二）用酶联免疫吸附实验分析蛋白质/多肽 酶联免疫吸附实验（ELIS