6X组氨酸标记（His-tag）蛋白纯化试剂盒产品说明书（中文.PDFVIP

6 X 组氨酸标记（His-tag ）蛋白纯化试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 组氨酸标记（His-tag ）蛋白纯化试剂是一种旨在通过氮川三乙酸镍金属亲和树脂的高度选择 性结合，进一步温和洗脱，获得非变性或天然的重组标记目标蛋白的权威而经典的技术方法。该技术由大 师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于融合或标记在微小片段组氨酸上各种目标蛋白的分离纯 化等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，结合能力强（5－10毫克/次），回收纯度和效率高达95％。 技术背景 研究编码蛋白首先通过重组 DNA 技术在细菌中表达，并容易获得纯化的目标蛋白。其中 6 X 组氨酸标记 （Hexahistidine tagged fusion protein ）蛋白系统有效地帮助获得纯化的目标蛋白。6 X 组氨酸标记系统与目 标蛋白在各种表达系统，包括细菌、杆状病毒和哺乳动物里融合表达，其作为标记的组氨酸只有 6 个，在 生理 pH 条件下不带电荷，几乎没有免疫原性，对目标蛋白的分泌、折叠、结构和功能没有影响。可以放 在 N 端或 C 端，能够高度亲和 Ni 离子（Nickel －nitrilotriacetic acid ；Ni －NTA ）达到天然或变性条件下进 一步纯化，从而得到满意的表达产物。除了 6 X 组氨酸标记蛋白系统，还有谷胱甘肽-S-转移酶（GST ） 融合蛋白系统、β－半乳糖苷酶融合蛋白、trpE 融合蛋白、硫氢还原（Trx ）融合蛋白系统等。 产品内容 平衡液（Reagent A ） XX 毫升 亲和液（Reagent B ） XX 毫升 洗脱液（Reagent C ） XX 毫升 产品说明书 1 份 保存方式 保存在－20℃冰箱里；有效保证 6 月 用户自备 变性液（Reagent D ）：用于变性融合蛋白纯化 透析液（Reagent E ）：用于蛋白纯化后透析 细菌可溶性总蛋白样品：用于纯化的待测样品 1.5毫升离心管：用于反应操作的容器 50毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制的容器 平式摇荡仪：用于混匀反应物 4℃台式离心机：用于沉淀反应物 4℃微型台式离心机：用于沉淀反应物 1 实验步骤 实验开始前，将试剂从－20℃冰箱里取出，在冰槽里融化。然后进行下列操作。 1． 从－70℃冰箱里取出用户自备的通过细菌扩增分离的细菌可溶性总蛋白样品 2． 置于室温下15 分钟，直至融化（使蛋白重新折叠） 3． 移出5毫升样品（等于1升菌液萃取物）到50毫升锥形离心管 4． 加入 XX 毫升 ，用手混匀 平衡液（Reagent A） 5． 加入 XX 毫升 ，用手混匀 亲和液（Reagent B） 6． 平放在平式摇荡仪上，在4℃温度下孵育 XX 分钟，速度为 XX RPM 7． 放进4℃台式离心机离心 XX 分钟，速度为 XX g 8． 小心抽去上清液 9． 加入 XX 毫升 平衡液（Reagent A），用手混匀 10．放进4℃台式离心机离心XX 分钟，速度为 XX g 11．重复实验步骤9至10四次 12．加入XX 毫升 ，用手混匀 洗脱液（Reagent C） 13．平放在平式摇荡仪上，在4℃温度下孵育XX 分钟，速度为 XX RPM 14．转移到1.5毫升离心管 15．放进4℃微型台式离心机离心XX 分钟，速度为 XX g（或 XX RPM ，例如eppendorf 5415R） 16．小心移取上清液到预冷的新的1.5毫升离心管，置于冰槽里 17．或保存纯化的蛋白在－70℃冰箱里 18．或移取5微升进行 SDS电泳鉴定以及BRADFORD 蛋白定量 19．（选择步