阴茎海绵体平滑肌细胞培养的鉴定.docVIP

阴茎海绵体平滑肌细胞的鉴定分析进展 陈世涛1 综述；吕伯东2，黄晓军2 审校 1.浙江中医药大学，浙江 杭州 310053：2.浙江中医药大学附属第二医院 浙江 杭州 310000 摘要 阐述体外培养阴茎海绵体平滑肌细胞(corpus cavernosum smooth muscle cell，CMSC)的鉴定方法。比较不同方法对于体外培养的阴茎海绵体平滑肌细胞(CMSC)的鉴定分析及其特异性，优化研究勃起功能障碍（erectile dysfunction ,ED）所需要的CMSC培养模型。 关键词 阴茎海绵体； 平滑肌细胞 ； 鉴定 Progress of corpus smooth muscle cells Identification and Analysis CHEN Shi-tao1, LüBo-dong2, HUANG Xiao-jun2 (1 Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou,Zhejiang 310053 China; 2 Second Affiliated Hospital, Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou, Zhejiang 310000 China ) Abstract ：To describe an effective identification method of corporal smooth muscle cells in vitro according to the requirement of study.To Comparison of different methods for identification analysis and specificity the cultured corpus cavernosum smooth muscle cells (CMSC) in vitro and optimize model of corpus cavernosum smooth muscle cells (CMSC) which is to research erectile dysfunction Key words : Corpus cavernosum；Smooth muscle cells； Identification 勃起功能障碍（erectile dvsfunction，ED）是一种多因素引起的男科难治性疾病[1]，严重影响患者的整体健康和生活质量[2]。阴茎海绵体平滑肌细胞(CSMC)是组成阴茎海绵体的主要功能成分，约占整个阴茎组织成分40％～50％，是调节阴茎勃起及维持勃起的重要因素，是阴茎神经调控的主要效应器部位[3-4] ，因此关于阴茎海绵体平滑肌细胞的研究显得尤为重要， 而CSMC 的培养和鉴定是研究的基础，因此CSMC纯化鉴定在细胞水平上研究ED的机制颇为关注，本文就体外培养的CMSC鉴定分析做一综述。 1988年, Krall 等[5]首先运用体外培养的人CMSC研究了勃起相关的生化反应。此后，体外培养扩增CMSC成为ED基础研究的重要手段[6]，但尚缺乏对体外培养的CMSC的特异性鉴定方法。Granchi等[7]很早就发现成人海绵体平滑肌细胞的培养过程中很难避免成纤维细胞污染。目前被奉为经典的Pilatz等[8]文献报道中海绵体平滑肌细胞的培养纯度也仅达到25%左右。现在鉴定CMSC的方法一般有光镜、透射电镜观察、相差显微镜观察、免疫组化印记法、免疫细胞化学法等[9]。 1 CMSC的形态鉴定 在常规染色中，第2代传代培养的CMSC常规苏木精、伊红染色，显微镜下观察。苏木精伊红染色显微镜显示培养细胞胞质被染成红色，且清晰、均匀，胞核染成蓝色。另外还有一些特殊的染色方法，参照杜卓民[10]方法，标本获取、固定同常规染色法，显微镜下观察。Masson三色染色法显示培养细胞胞质被染成红色。VG染色显示培养细胞胞质被染成黄色，传代培养的细胞Masson三色染色法及VG染色细胞纯度在98％以上[9]。显微镜做形态观察时，观察传代细胞培养至第2或第3代，培养细胞制成超薄切片，透射电镜下观察细胞形态，观察培养的细胞呈长梭状、放射状生长、成束的细胞平行排列。部分区域呈多层重叠，部分呈单层。呈现平滑肌细胞典型的峰—谷状生长。可观察到胞内染色质分布均匀，核仁清晰，胞内含有丰富的肌丝。使用相差显微镜时，可见培养细胞呈长梭型、放射状生长，成束的细胞平行排列。部分区域细胞多层重叠，部分区域呈单层，高低起伏，呈现平滑肌细胞特征性的峰-谷状生长[9]。 关于形态