2019年蛋白A(ProteinA)酶联检测试剂盒（可拆卸）说明书.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT 4 淄博云桥生物技术有限公司 蛋白A(Protein A)酶联检测试剂盒(可拆卸)说明书 产品目录编号# AB000109C 此试剂盒包含检测生物药物内蛋白A (Protein A) 杂质所需要的全部组分。 请在操作之前仔细阅读此说明书。 本试剂盒只能用于科学研究，不能用于医学诊断。 背景资料 在单克隆抗体药物的纯化过程中，以蛋白A（Protein A）为基础的亲合层析是广泛应用的纯化方法之一，单克隆抗体可以有效的在此步骤中得到纯化。蛋白A 的最初来源是细菌（Staphylococcus aureus）细胞壁中的一个蛋白质，研究表明蛋白A 可能对人体有潜在的危害，它的生物学作用包括刺激人体多种细胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的释放。由于在蛋白A 亲合层析柱使用过程中会有微量的蛋白A 从层析柱上脱落下来，因此用精确灵敏的方法来确证单克隆抗体药物中蛋白A 的残留处于一个较低的和稳定的水平是单克隆抗体药物的质量标准之一。矚慫润厲钐瘗睞枥庑赖賃軔朧碍鳝绢懣硯涛镕頃赎巯驂雞虯从躜鞯烧。 蛋白A (Protein A) 酶联检测试剂盒是用来定量分析生物药物中蛋白A杂质的试剂盒。首先，用不同浓度的蛋白A标准蛋白制作一条标准曲线，然后再根据标准曲线来分析生物药物中残留蛋白A的含量。具体方法为：先将蛋白A标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗蛋白A抗体的96孔平板中。经过1.5小时的保温，蛋白A与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原－抗体复合物。此复合物被随后加入的生物素标记的抗蛋白A的抗体结合并进一步形成更高级的复合物，反应45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物（Streptavidin-HRP Conjugate），静置30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合，从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质，加入TMB底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应，待颜色反应一段时间后，终止反应。用酶标仪在450 nm波长下测定其结果，此结果能间接地反应结合到平板上的蛋白A数量的多少。根据蛋白A标准曲线定量分析生物药物中残留蛋白A的含量。聞創沟燴鐺險爱氇谴净祸測樅锯鳗鲮詣鋃陉蛮苎覺藍驳驂签拋敘睑绑。 检测盒提供的组分 1. 已包被的96孔平板（可拆卸） 一个包被了兔抗蛋白A抗体的可拆卸平板。 检测盒 AB-000109C （一个可拆卸平板） 2.蛋白A标准品（Protein A Standards） 用一种特殊的稀释液将蛋白A标准品稀释为七个浓度，从3.2 ng/ml到0. 05 ng/ml（两倍递减），另外包括一个空白对照样品。残骛楼諍锩瀨濟溆塹籟婭骒東戇鳖納们怿碩洒強缦骟飴顢歡窃緞駔蚂。 检测盒 AB-000109C （1250 μl /管） 3. 十倍浓缩的磷酸缓冲液（10x PBS-T） 用去离子水将十倍磷酸缓冲液10倍稀释至450 ml (1 x PBS-T)，再用此溶液洗脱平板以及配置报告抗体、链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物稀释液和样品稀释液。（此磷酸缓冲液含0.1% Tween-20）。酽锕极額閉镇桧猪訣锥顧荭钯詢鳕驄粪讳鱸况閫硯浈颡閿审詔頃緯贾。 检测盒 AB-000109C (45 ml) 。 4. 稀释液组分（Dilution Buffer Composition） 将稀释液组分全部加到35ml的1 x PBS-T溶液中溶解，混匀，用作报告抗体、链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物稀释液。从稀释好的溶液中取1ml用1 x PBS-T稀释50倍得50ml溶液，作为待测样品和回收率样品的稀释液。彈贸摄尔霁毙攬砖卤庑诒尔肤亿鳔简闷鼋缔鋃耧泞蹤頓鍥義锥柽鳗铟。 检测盒 AB-000109C (0.35g) 。 5. 报告抗体（Reporting Antibody） 生物素标记过的抗蛋白A的抗体 检测盒 AB-000109C （150 μl /管），用稀释液（15ml）将0.5 mg/ml的报告抗体稀释100倍至5 μg /ml，然后使用。謀荞抟箧飆鐸怼类蒋薔點鉍杂篓鳐驱數硯侖葒屜懣勻雏鉚預齒贡缢颔。 6. 链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物（Streptavidin-HRP Conjugate） 在一种特殊稳定剂中的链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物。 检测盒 AB-000109C （375 μl / 管），用稀释液（15ml）将4 μg/ml的母液稀释40倍至0.1 μg /ml，然后使用（注：管底沉淀不影响实验）。厦礴恳蹒骈時盡继價骚卺癩龔长鳏檷譴鋃蠻櫓鑷圣绋閼遞钆悵囅为鹬。 7. TMB底物 (TMB Substrate) 检