临床分离金黄色葡萄球菌生物膜相关基因的PCR.doc

PAGE PAGE 1 临床分离金黄色葡萄球菌生物膜相关基因的PCR分析 孙凤军，枉 前，夏培元（第三军医大学西南医院药剂科，重庆 400038) 摘 要: 目的 确定临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成能力和生物膜相关基因之间的关系，为生物膜形成的机理研究提供依据。方法 96孔板番红染色法检测生物膜的形成，icaAD、icaBC、sar、agr和sigB的PCR扩增，并对产物进行测序和同源性比较。结果 27株金黄色葡萄球菌中共有17株形成了肉眼可见的生物膜，其中以X387和X409两株最明显；有22株扩增出icaAD和icaBC，全部菌株扩增出sar、agr和sigB。结论 ica是形成金葡菌生物膜的关键基因，但ica在形成生物膜过程中需要其他基因的协同作用。 关键词：金黄色葡萄球菌；生物膜；生物膜相关基因 中图分类号 R378.1+1 文献标识码： A； 文章编号 PCR analysis of clinical isolated Staphylococcus aureus biofilm associated gene Sun Feng-jun ,Wang Qian ,Xia Pei-yuan（pharmacy department of Southwest Hospital, Third Military Medical University,Chongqing 400038, China） Abstract： Objectthe correlation of clinical isolated Staphylococcus aureus biofilm forming ability and biofilm associated gene, For the further study of the mechanism of biofilm forming. Methods Screening of biofilm was observed in 96 well plates with safranine ; icaAD、icaBC、sar、agr and sigB was amplified. Results There were 17 of 27 strains could form biofilm, especially to X387 and X409; icaAD and icaBC were found in 22 isolates and sar, agr and sigB were in all 27 S.aureus strains. Conclusion Ica operon is the key gene of the biofilm formation but it need help of others Key words: Staphylococcus aureus;Biofilm;Biofilm associated gene ?Chinese?Library?Classification(CLC): R378.1+1 Document?code: A Article?ID 基金项目：国家自然科学基金 作者简介：孙凤军，男，黑龙江大庆市人，药师，主要从事细菌耐药性的研究。电话：（023-mail: c 通信作者：夏培元，E－mail：py_xia@ PAGE 2 PAGE 8 金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)是医院感染的重要病原菌之一，也是生物膜感染常见的病原菌，在导管相关感染败血症的致病原中，金黄色葡萄球菌是最常见的致病菌之一[1，2]。形成生物膜的金黄色葡萄球菌具有高度的耐药性并能逃避免疫系统的攻击，其感染易慢性化并难于控制，因此对金黄色葡萄球菌等临床重要病原菌的生物膜形成机制的研究已成为抗感染研究领域的热点。目前对金黄色葡萄球菌生物膜的形成机制仍不清楚。初步研究显示生物膜的形成首先是由细胞壁相关因子调节的细胞表面的附着,随后细菌在sar、agr和sigB等基因的调节下[3-5]，主要通过ica操纵子表达产物共同催化合成的多糖胞间粘附素(polysaccharide intercellular adhesin， PIA)介导，细胞增殖并相互聚集成细胞团块，继而形成生物膜[6]。 为了解这些可形成生物膜与未能形成生物膜的金黄色葡萄球菌中生物膜形成相关基因的存在情况，有研究对部分生物膜形成相关基因进行扩增，并进行了统计分析，但主要集中于单一基因的分析[2-5]。本实验针对生物膜形成相关基因ica、sar、agr和sigB设计特异性引物