斑马鱼干扰素启动子及基因结构之选殖及分析.doc

斑馬魚干擾素啟動子及基因結構之選殖及分析 Organization and promoter analysis of the Zebrafih 研究生：游原鏗 Yu, Yung-Kang 指導教授：黃卓治 Huang, Tzou-Chi 陳志毅 Chen, Jyh-Yih 【摘要】 干擾素 (Interferon, IFN) 是抵禦病毒入侵的第一道防線，為了要深入瞭解調控IFN基因轉錄表現的分子機制，本研究選殖出斑馬魚IFN基因的啟動子 (promoter) 區域，以螢火蟲冷光表達系統分析斑馬魚IFN啟動子活性。將不同長度的IFN啟動子片段轉染至斑馬魚肝臟細胞株 (ZFL) 中，發現最大活性的啟動子片段為-2.2 kb。在本研究中，也為了探討雙股 (ds) RNA－病毒複製過程的中間產物，對IFN基因表現的影響程度，本研究採用合成之雙股多聚肌苷酸多聚胞苷酸 (poly[I]:poly[C]) 以誘導IFN基因表現，在1、10、100 μg/mL等不同濃度的poly(I): poly(C)誘導下，結果顯示在濃度10 μg/mL時，啟動子-2.2 kb片段表現最大活性值。斑馬魚IFN啟動子序列經轉錄因子資料庫分析比對，加以列舉轉錄因子可能之結合位置。為了更進一步觀察IFN基因在個體發育時期的表現，將IFN啟動子最長片段 (-2.2 kb) 後面接上綠螢光 (GFP