化学r渗透压法温和破碎处理下大肠杆菌细胞胞内.pdfVIP

— １４６— 江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１９期 赵烨清，石　莉，欧阳臻，等．化学－渗透压法温和破碎处理下大肠杆菌细胞胞内蛋白质的释放率［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１９）：１４６－１４９． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．１９．０３２ 化学 －渗透压法温和破碎处理下大肠杆菌细胞 胞内蛋白质的释放率 赵烨清，石　莉，欧阳臻，闻崇炜 （江苏大学药学院，江苏镇江２１２０１３） 　　摘要：恰当的细胞破碎工艺是获取胞内蛋白质的必需环节，然而现有细胞破碎技术仍有较多不足。为了研究合适 的细胞破碎方法，拟通过化学法与渗透压法的联用，建立化学－渗透压法温和高效破碎大肠杆菌细胞的新工艺。结果 表明：（１）单用化学法处理大肠杆菌细胞，最高仅能释放３７．３％的胞内蛋白质，而化学 －渗透压法最高可以释放 ８４２％的胞内蛋白质；对渗透压处理环节进行优化后，胞内蛋白质释放率提高至９３．１％及以上；（２）以优化的化学－ 渗透压法释放重组原动蛋白２（ＰＫ２）工程菌细胞的胞内蛋白质，其中７０．５％～８０．２％重组ＰＫ２ 呈可溶性，而超声 β β β 法处理的样品中不含有可溶性重组ＰＫ２，表明化学－渗透压法不仅简便高效、成本低廉，而且有利于保留可溶性重组 β 蛋白质，而超声破碎法会导致可溶性蛋白发生变性沉淀而增加蛋白质分离的难度。综合分析可知，化学－渗透压法在 基因工程及生物工程中具有良好的应用前景。 　　关键词：化学－渗透压法；细胞破碎；温和高效；胞内蛋白质；可溶性 　　中图分类号：Ｑ９３９．９７　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）１９－０１４６－０４ ［６］ 　　大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，简称Ｅ．ｃｏｌｉ）是基因工程与生 低 ；生物酶法条件温和、破碎效率较高，但碎菌成本较 ［７］ 物工程中表达重组蛋白质最常用的宿主菌。重组蛋白质通常 高 。因此可见，开发温和且具有高破碎效率的简便工艺在 被表达在Ｅ．ｃｏｌｉ胞内，必须进行细胞破碎后才能进行相应的 基因工程及生物工程中有较高的应用价值。 ［１］ 形态结构学研究表明，Ｅ．ｃｏｌｉ细胞壁是由脂多糖层、磷 分离纯化 。现有的细胞破碎方法分为机械法、化学法、物 理法及生物酶法四大类，在实际应用中这些方法仍有较多不 脂层与肽聚糖层组成的复合结构，具备较强的抗拉伸与抗剪 足。例如，机械法破碎效率高，但是需要高速珠磨机、高压匀 切能力。渗透压法利用渗透压差破碎细胞，条件温和，可以很 浆机等贵重设备，同时由于发热大，可能重组蛋白质的生物活 好地保留蛋白质的生物活性，但是作用力较弱，不足以完全破 ［２－３］ ［８］ 性 ；化学法简便，但所用有机溶剂及变性剂也可能影响重 碎Ｅ．ｃｏｌｉ细胞壁，目前仅用于释放出周质空间的蛋白质 。 组蛋白质的生物活性［４－５］；物理法条件温和，但破碎效率较 本试验拟研究将化学法与渗透压法联用（本研究均简称为化 学－渗透压法），从而实现既高效彻底破坏Ｅ．ｃｏｌｉ细胞壁，又 收稿日期：２０１６－０５－０４ 完全释放胞内蛋白质，同时能保留蛋白质生物活性的可能性。 基金项目：国家自然科学基金（编号；江苏大学高级人才 本研究为该法处理 Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ