3-基因工程制药技术(2).ppt

第二章 基因工程制药技术;获得目的基因; 基因工程菌构建流程;一 表达载体构建;1.表达载体的设计;2、目标基因PCR定位克隆;PCR循环;;3.酶切反应和连接反应;4.转化、筛选与鉴定;筛选方法;;b. 双抗生素筛选;;;;;;菌落原位杂交的原理 ;鉴定方法;二 基因工程菌的构建;1.大肠杆菌表达系统;;基因工程大肠杆菌的应用 ;PEG;2. 酵母表达系统;;基因工程酵母的应用;水蛭素;;三 基因工程菌的培养与发酵;碳源;氮源;无机盐;选择剂selective agent;诱导物;2.培养工艺与控制;大肠杆菌和酿酒酵母生长最低温度为10℃ 大肠杆菌生长最适温度为37℃，最高温度为45℃。 酿酒酵母生长最适温度为30℃，最高温度为40℃。;两段变温发酵培养： 前期：较高温度发酵，获得足够高的菌体密度； 后期：较低温培养发酵，对菌体合成目标产物的抑制不明显，但可有效抑制目标产物的降解和包涵体形成，总体提高工程菌的生产能力??? 温度诱导型大肠杆菌表达系统：生长期维持37℃，生产期提高温度42℃。;pH值对发酵的影响;pH值控制;溶解氧控制;四 重组人干扰素生产工艺;广谱抗病毒活性（rhuIFNα） 慢性乙型、丙型、丁型肝炎；疱疹、病毒性角膜炎。 直接抗肿瘤活性（rhuIFNα） ??毛细胞和慢性髓样白血病、Kaposi肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。 免疫调节活性——治疗慢