病毒感染的检查方法与防治原则1.pptVIP

生物制品： 微生物及其代谢产物、 动物免疫血清、 免疫细胞、 细胞因子。 防治和诊断感染性疾病 生物制品： 微生物及其代谢产物、 动物免疫血清、 免疫细胞、 细胞因子。 防治和诊断感染性疾病 生物制品： 微生物及其代谢产物、 动物免疫血清、 免疫细胞、 细胞因子。 防治和诊断感染性疾病 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，还特别注意以下原则： 采集急性期标本 使用抗生素：标本用“双抗”或两性霉素B处理 冷藏保存、快速送检 采集双份血清 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） 二、病毒的分离与鉴定 一般程序： 标本 无菌处理 动物接种 鸡胚培养 细胞培养 指标阳性 指标阴性 病毒鉴定 盲传2～3代 指标阴性 病毒阴性 1. 细胞培养 根据生长方式分类： 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 从细胞来源、染色体特征及传代次数分类： 原代细胞（primary cell） 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） （一）病毒的分离培养 病毒的细胞培养 细胞培养瓶 单层细胞 1.细胞培养 （1）原代和次代细胞培养 组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基 (原代细胞) 单层细胞 (次代细胞) 传代培养 蛋白酶 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 （2）二倍体细胞培养 体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。 特点：①对多种病毒敏感 ②不带异种蛋白(人源性) ③不带病毒，无致瘤潜能 ④可传50代左右 1.细胞培养 （3） 传代细胞培养 特点：①对多种病毒敏感性高 ②繁殖能力高，传代时间长 ③有致癌危险，不能用于疫苗生产 1.细胞培养 病毒在培养细胞中增殖的指征： 致细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 红细胞吸附（hemadsorption） 病毒干扰作用（viral interference） 细胞代谢改变 （一）病毒的分离培养 ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 （1）致细胞病变效应（CPE） 麻疹病毒感染细胞 呼吸道合胞病毒感染细胞 ②形成多核巨细胞或称融合细胞 （1）致细胞病变效应（ CPE） ③形成包涵体(inclusion body) （1）致细胞病变效应（CPE） 腮腺炎病毒感染细胞 （2）红细胞吸附（hemadsorption） 病毒囊膜表面血凝素(HA) ＋ 红细胞表面HA受体 （3）干扰现象（interference） 风疹病毒＋猴肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 埃可病毒＋猴肾细胞 病毒增殖，CPE(＋) ＋猴肾细胞 风疹病毒 埃可病毒 埃可病毒被抑制，CPE(－) （4）细胞代谢改变 2. 鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 2. 鸡胚