基于蛋白质反式剪接的双载体凝血Ⅷ因子基因转移ViewTableof.PDFVIP

基基于于蛋蛋白白质质反反式式剪剪接接的的双双载载体体凝凝血血Ⅷ因因子子基基因因转转移移 朱甫祥, 刘泽隆, 迟晓艳, 屈慧鸽 and 刘 钦 Citation: 中国科学C辑: 生命科学 39, 746 (2009); doi: 10.1360/zc2009-39-8-746 View online: ttp://engine.scic /doi/10.1360/zc2009-39-8-746 View Table of Contents: ttp://engine.scic /publis er/scp/journal/SCI SIN Vitae C/39/8 Publis ed by t e 《中国科学》杂志社 Articles you may be interested in 增强的蛋白质反式剪接作用提高肝脏靶向双载体凝血第八因子转基因小鼠的血浆凝血活性 SCIENTIA SINICA Vitae 43, 298 (2013); 人凝血因子Ⅸ基因在中国仓鼠卵巢细胞中的转移及表达 C inese Science Bulletin 34, 932 (1989); 利用核糖体基因区打靶载体靶向表达改造型人凝血因子Ⅷ C inese Science Bulletin 50, 1972 (2005); 含有人凝血因子Ⅸ自身内含子Ⅰ的反向逆转录病毒载体构建及表达 C inese Science Bulletin 42, 2656 (1997); 带有人凝血因子Ⅸ cDNA的反转录病毒载体的构建及其在离体细胞中的高效表达 Science in C ina Series B-C emistry , Life Sciences Eart Sciences (in C inese) 24, 1183 (1994); 中国科学 C 辑 :生命科学 2009 年 第 39 卷 第 8 期 : 746 ~ 754 SCIENCE IN CHINA PRESS 基于蛋白质反式剪接的双载体凝血因子 基因转移 ① ① ① ① ② 朱甫祥 , 刘泽隆 , 迟晓艳 , 屈慧鸽 , 刘相钦 ① 鲁东大学生命科学学院, 烟台 264025; ② Department of Biochemistry and Molecular Biology, Medical College of Dalhousie University, Halifax B3H 4H7, Canada E-mail: fuxiangmail@163.com 收稿日期: 2009-04-10; 接受日期: 2009-07-02 山东省自然科学基金(批准号: Y2005D14)、烟台市科技计划(批准号: 2008152)、教育部留学回国人员科研启动基金和鲁东大学科研启动 经费资助项目 摘要 以intein 的蛋白反式剪接为工具, 研究了运用双载体的真核细胞凝血因子(F ) 关键词 基因转移, 通过翻译后剪接得到完整的功能性 F 蛋白. 将 B 结构域大部分缺失(Δ761~ intein 蛋白质反式剪接 1639)的人功能性F (BDD-F ) cDNA 于剪接所需保守残基 Ser1657 前断裂为重链和轻链, 凝血因子 分别与106 和48 个氨基酸的mini Ssp DnaB intein 的N 端(IntN)和C 端(IntC)编码序列融合, 双载体基因转移 构建一对在质粒 pcDNA3.1 的强启动子CMV 驱动下的真核表达载体. 用脂质体共转染至 293 细胞和COS-7 细胞, 培养48 h 后, 收集细胞上清, 用ELISA 检测培养上清中剪接形成 的BDD-F 蛋白水平, 用Coatest 法检测上清的功能性F 生物活性, 并用Western blot 观 察细胞内的 BDD-F 蛋白质剪接. 结果显示, 两种细胞培养上清中有较