HE的染色基本原理资料.ppt

（二）切片脱落 1. 由于组织处理不当所致 ①组织本身的原因，如凝血块、血栓、干涸成过硬的组织及组织碎屑等； ②组织透明不足，石蜡不能浸透，切片时免强切出的片子脱蜡时大收缩，入水或染液后易脱落； ③组织脱水透明过度，浸蜡时间长或温度太高，引起组织收缩硬脆，不易切片完整切片。 2. 切片方面原因 ①切片过厚； ②薄片水温低，附贴不牢或附贴下含气泡； ③烤片时间长或温度高，蛋白甘油没能发挥贴附作用； ④载玻片清洗的不洁净，含有油赋或混入尘污导脏东西。 3. 染色过程中的原因 ①脱蜡时未经自高至低的各级酒精的缓冲调解逐渐加水，用水急冲，振荡过甚； ②染液或试剂的酸碱度不适宜或停留时间较久，如HE返蓝所用碱性溶液过大时易引起脱落； ③染液或用具不洁净。 （三）染色不均 ①组织取材固定不当，如：组织取材过大或过厚，所用固定液浓度不对时，不能将组织固定透或固定不完全；②切片厚薄不均或切片时出现横纹也能引起不均；③染色处理不当引起染色不均的原因 a. 组织脱蜡不彻底； 原因：试剂陈旧，温度低b. 染液试剂量少时；c. 分化剂浓度大，分化过强； 原因：进行急速分化或在分化后没有迅速入水，使之终止分化均可造成染色不均d. 染色或分化时、组织切片上有气泡时，则气泡内的组织可能染不上色或没分化着，使之染色不均。 （四）模糊不清 ①取材时组织已经腐败自溶或取材后没能及时固定和固定液浓度不够而组织出现自溶时，在染色组织切片上，往往是一片模糊；②组织切片脱蜡不彻底，造成染色染不上或着色很淡，镜检时呈现模糊不清；③染色后脱水不彻底，肉眼所见为云雾状，镜下模糊不清；④封固切片时因空气潮湿，封片迟缓或呼吸造成切片上水珠，亦可出现模糊不清。 （五）切片污染 ①组织碎屑污染；②染液及试剂污染；③灰尘污染；④霉菌污染。 九、易褪色的原因 ①染料的性质及染料与组织的作用问题 　　　特染过程中，如：VG染色其与组织形成的颜色不牢固，再加苦味酸能够分化及氧化酸性复红； ②制片过程中原因所致 　　　这类褪色是指在不因褪色的时间内而出现褪色，如：HE的结果在几个月内就褪色了，这是因该造成其褪色的原因如下： a. 固定不佳或或时间过久，固定液PH值不适宜；b. 脱水前组织没有经过流水冲洗；c. 染色时染液的酸碱度不适宜，如：HE染色时用碱性大的溶液返蓝，并经自来水长时间冲洗，就不易褪色，特别是伊红染液加促染剂冰蜡酸过多时，染色结果保持时间很短； d. 组织切片染色后脱水透明失当；e. 封固时组织切片内混入水分，含有气泡封固剂稀或用量少，盖玻片小或不平，盖玻片位置不适当或被移动等，不但可致切片染色模糊不清，而且亦易褪色；f. 染色后的切片长期地置于日光或强烈高温的灯光下，尤其是暴晒于日光下最容易引起切片褪色，另外，将封固后的切片加温烤干或室温过高时，一切能加速氧化易引起褪色。 十、染液的配制 1. 迈耶（Mayer）氏苏木素染液： 苏木素 0.5g 钾明矾 25g 碘酸钠 0.1g 水合氯醛 25g 柠檬酸 0.5g 蒸馏水 500ml 先将苏木精加入煮沸的蒸馏水内，搅拌充分溶解后，再次依次加入钾明矾和碘酸钠，至钾明矾全部溶解，然后加入水合氯醛和柠檬酸，加热煮沸后5分钟，冷却后过滤，放置8~12小时即可。 3. 伊红： 伊红y（醇溶） 2.4g 酒精 1000ml 微波炉高火 2分钟 搅拌溶解冷却后加3ml的冰醋酸 2. 吉尔 （Gill）改良苏木素 苏木素 2g 无水乙醇 250ml 硫酸铝 17.6g 碘酸钠 0.2g 冰醋酸 20ml 蒸馏水 250ml 先将苏木素溶于无水乙醇中，再将硫酸铝溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合，加入碘酸钠，最后加人冰醋酸。 3. 促染液： 碳酸氢钾 1g 硫酸镁 10g 自来水 500ml 谢 谢 ！ HE的染色基本原理 浙江省肿瘤医院病理科 李筠 一、细胞核的染色原理 细胞核内的染色质主要成份，去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色，苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。结果：细胞核呈蓝色，软骨基质，钙盐颗粒呈深蓝，粘液呈灰蓝。 灰蓝色 蓝色 深蓝色 二、细胞浆的染色原理 细胞浆内主要成份是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与PH值有密切关系，当PH调到蛋白质等电点4.7~5.0时，胞浆对外不显电性，