基于天然化学连接的FRET巯基探针研究-化学生物学专业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 巯基在生命体系中扮演了重要的作用，生命体系中巯基分子的水平变化与一 系列疾病有着密切关系。半胱氨酸与同型半胱氨酸的浓度是多种疾病的检测指 标，而谷胱甘肽，则作为细胞内存在量最大的非蛋白巯基分子，执行了包括维 持细胞内氧化还原行为，异型生物质代谢，胞内信号传导和基因调控在内的众 多细胞功能。利用荧光方法检测生命体系中的巯基具：有高灵敏度，良好的动力 学范围，高特异性，低检出限等优点，除此之外其最大的优势则是细胞内检测。 荧光共振能量转移(FRET)白60余年前被发现后，在化学与生命科学领域 已被广泛的应用，此前也有利用巯基对二硫键进行切割的反应设计、合成并表 征针对巯基的荧光探针的报道。我们利用与蛋白质剪切过程类似的天然化学连 接(Native Chemical Ligation，NCL)反应的机制设计FRET巯基荧光探针。将 FRET对键合在硫酯两端，通过巯基化合物对硫酯键的切割实现破坏FRET体系， 观测到荧光信号变化的目的。探针具有良好的FRET效率，具有很好的选择性， 能够区分不同的巯基底物，并且能够用于细胞成像。 关键词：巯基，荧光探针，荧光共振能量转移．，天然化学连接 Abstract-_____-●—-—_-_________--——-_-______—●——-—___________-———__———__________--__—__—____