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《植物组织培养实验》课 程 教 案 大庆师范学院生命科学学院 讲 稿 课 程： 植物组织培养实验 教 师： 汪洋 专 业： 生物科学 年 级： 2008级 大庆师范学院生命科学学院制 实验一 实验室的设备及要求(1) 培养基及常用激素配制(2) 一、实验目的 1、了解组织培养实验室构造及其常用设备 2、掌握组培实验常用培养基种类及作用 3、掌握组培实验常用激素种类及配制方法 二、实验原理 1、实验室设计与要求 在进行组织培养工作之前，首先应对工作中需要那些基本的设备条件有全面的解。 实验室设计最基本应该有三个室： 准备室 无菌操作室 培养室 一、准备室 完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装及高压灭菌；器皿、材料的洗涤等工作。 1、水槽：洗涤用 2、高压灭菌锅：培养基、工具的灭菌 3、干燥箱：器皿等烘干用 4、冰箱：存放培养基母液、酶、激素等用 5、酸度计（pH计、酸度测定计）：培养基酸度测定用 6、天平： 制作培养基用 粗天平（1／1000）：称量大量元素、蔗糖、琼脂等 精密天平（ 1／10000、 1／100000 ）：称量微量元素、激素等 7、玻璃器皿：三角瓶、试管、培养罐、培养皿、烧杯、量筒、 移液管等 8、移液枪（根据条件需要）由枪和枪头组成 9、其他：工作台、微波炉、电炉等 二、无菌操作室 无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁 1、超净工作台：内设紫外灯、吹风装置 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。 2、无菌操作用的器具：刀、镊子、剪刀、酒精灯等 3、医用小平车：推送、放置培养基用 三、培养室 应保持干净 条件：温度，因植物不同稍有差别，一般保持在25℃ 光照，包括每日光照时间和光照强度，一般每日13h ， 2000－3000lux 1、培养架 放置培养物，每层顶部装有灯管进行照明，可用灯管数量调节光照强度 2、空调机 调节温度 3、配电板 设置电器和开关，用以管理室内的电源 4、时控器 自动开灯、关灯 2、操作前的准备工作 接种室在接种前4-5 d必须通风换气。在接种前一天对接种室进行全面消毒，一般用40%福尔马林进行全面喷雾，并密闭24 h，然后打开换气窗10-15 min.。 A: 实验器具和材料的准备 B: 用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。 C: 关紫外灯、打开风机，过5-10min进入缓冲间，以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不要下工作台） D: 用70－75％消毒双手。试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器械在其火焰上灼烧，冷却待用。注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。移液管不能灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不能时间太长。 培养器材的清洗与灭菌 在细胞工程实验中，离体细胞对任何毒性物质都十分敏感。毒性物质包括解体的微生物和细胞残余物以及非营养的化学物质。某些化学物质仅0.01μg/L就会对细胞产生毒性作用，因此对培养器皿的清洗是组织培养中一项极为重要的环节。 A、新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120 B、使用过的玻璃仪器的清洗 先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用。清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗. C、金属用品洗涤  金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥 （1）干热灭菌适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：150℃ （2）湿热灭菌 适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 培养基中某些成分遇高温分解（如某些生长调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。 灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至50℃ （4）射线灭菌主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20-30min。注意：关灯后5min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机 、 （5）火焰灼烧灭菌用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于