提高PTM分析中肽谱分离的质量-Agilent.PDFVIP

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2019-03-29 发布于天津
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提高PTM分析中肽谱分离的质量-Agilent.PDF

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提高 PTM 分析中肽谱分离的质量应用简报生物治疗药物和生物仿制药作者前言 Suresh Babu C.V. 单克隆抗体 (mAb) 等蛋白质的翻译后修饰 (PTM) 是确定药品有效性和安全安捷伦科技公司性的关键质量属性 (CQA)。分析技术的进步加快了 PTM 表征这项艰巨任务的速度。在生物制药行业，肽谱分析是蛋白质鉴定的常用方法。其中包括通过酶解生成肽片段，然后进行液相色谱 (LC) 分离、检测和肽段鉴定。肽谱分析与质谱 (MS) 检测联用，可鉴定单个氨基酸变化和 PTM。LC/MS 是 PTM 分析的首选技术。但由于蛋白质酶解物较为复杂，肽谱分离始终是一项具有挑战性的工作。高分离度和可靠的肽谱分离是可靠鉴定 PTM 的关键。目前的 LC/MS 方法中，采用质谱兼容的甲酸 (FA) 离子对试剂法，信号强度要优于其他改性剂。但 FA 的缺点是，与多种 C18 固定相配合使用时峰形较宽并会出现拖尾峰，从而导致肽对发生共洗脱。表征 PTM 时，需要对复杂的胰蛋白酶酶解物中经过修饰和未经修饰的肽进行高分离度液相色谱分离。肽保留和 MS 信号分别会受到所选反相液相色谱柱和流动相离子对试剂的影响。因此，选择正确的液相色谱柱对于提高含 PTM 肽的分离度至关重要。样品前处理分离鉴定数据分析 • 肽谱分析胰蛋白酶 • 序列确认 • 蛋白质覆盖 Agilent AdvanceBio • 关键质量属性 mAb 肽酶解物 Peptide Plus 色谱柱 Agilent 1290 Inﬁnity II LC 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 我们之前的研究证明，使用 Agilent