一种新型家蚕核多角体病毒Bac to Bac系统构建.pdfVIP

维普资讯 40卷 2期 微 生 物 学 报 VoI_40 NO．2 2000年 4月 Am M B ∞ $iniea ApriI 2000 ⑦f砧一J 一 种新型家蚕核 多角体病毒 BactoBac系统的构建 ／ ＆_7g2 卷 刁振宇 齐义鹏 周宗安 512．口一弓 (南京军区军事医学研究所舟于生物学 妻验室 南京 210002) (武汉大学病毒研究所 武汉 430073) 提 要 ：用家蚕核型多角体病毒 的全基 因组 DNA 与 Ac-BacmidDNA共转染家蚕 Bran 细胞 ， 构建转座一穿梭载体 Bm-Bacmid。另一供体质粒 以转 座方式将 乙肝病毒 e抗原基 因 HBeAg 整合 到 Bm-Bacmid的 attTn7位 点上成为重组 rBmHBe。结果表 明 Bm-Bacmid既能在 大肠杆 菌 中 以质粒 的形式复崩 ，又能在 家蚕 BmN 细胞和草地 夜蛾 Sf9细胞 中复制 ，形成 感 染性病 毒 粒子 。Southernblotting证 实重 组 病 毒 的构 建是 正确 的。BmN 细 胞 能 正 确 识 别 与 切 钢 HBeAg信号肽序刊 ，SDS表 明HBeAg基 因在家蚕细胞 中高教表达 ，ELISA测定培养上 因表达 中圈分粪号 ：$884．5 文献标识码 ：A 文章螭号：0001—6209(2000)02—0155—60 自1983年 SmithLlj用苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 (AcNPV)作载体在 昆虫细胞 中表 达 干扰紊 以来 ，掀起 了一个 昆虫病毒表达系统表达外源基 因的热潮 。10多年来 ，Smith 的经典克隆策略得到广泛应用 。但该策略重组率极低 (O．1％～1．0％)，程序繁琐 。1990 年 ，Hartig 等首次提 出单线型化策略，1993年改进成双线型化策略，提高 了重组效率 ，但 仍需采用空斑技术 。1993年 Luckow等_3采用噬茵体 下 的复制子构建 AcNPv 穿梭载 体 ，取 Baculovirus和 plasmid的字头字尾命名为 Baemid，即杆状病毒质粒之意 。这一重大 创新打破 了 100多年来必需用活细胞复制病毒基 因组 的老概念 。Bacmid在细菌细胞 中 是一个质粒 ，可 以低拷贝复制，在 昆虫细胞中是一个病毒，可 以复制、表达、装配子代病毒。 从细菌(Bacteria)到杆状病毒 (Baculovirus)的全部操作都在细菌 中进行 ，因此这一策略又 称 BaotoBae策略 。重组率达到 100％，操作简单 ，其需 10--15d即可构建成重组病毒 。然 而 ，这一策略只能用 于 AcNPV 的 Baemid和草地夜蛾细 胞 (Sf9)。本 文 用 Ac—Bacmid作基 础 ，通过共转染 同耀重组得到双 穿梭 的 Bm—Baemid，既可用家蚕细胞和家蚕作受体 。也可 用 Sf9作为宿 主细胞表 达外源 基 因。HBeAg由 I-mcAg氨 基端 的 149个氨 基酸 组成 。C基 因编码 的HBcAg有 183个氨基 酸 ，在 C基 因上游有 一个 896p的前 C序列 ，它与 C基 因的 共 同表达产物 (前 C蛋 白)在 内质 网膜经 白水解酶 的作用 ，去掉 N端 的信号肽及 C端强碱 *江苏省 冉热科学基金谭题 (B 作誊筒介 ：邓小昭 (1956一)，女，南京军区军事医学研究所副研究员，博士，现从事分子生精学研究 收一13期：199812-15，惨 目目期：1999-04—23 维普资讯 156