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临床实用病理学技术 江医上饶分院病理教研室 方 义 湖 第一讲 组织切片制作技术常规 （H-E染色法) 一、病理标本的接收 二、组织固定 三、取材 四、组织脱水 五、包埋 六、组织石蜡切片 七、常规染色 八、封片 一、 病理标本的接收 是临床与病理科交接的首要环节，程序如下： 1、核对病理申请单是否与标本匹配 名称、数目、大小、部位、组织来源、临床诊断等 2、检查标本大小与固定液比例是否合适 4%的中性甲醛或10%的中性福尔马林 小标本：6---10倍量 大标本：切开固定 3、编上病理号，录入电脑存档 二、 组织的固定 1、固定的目的和意义 目的：保持原有的形态和结构（生理、病理、免疫） 意义：是制作优秀切片的前提和基础 2、注意事项： 1）及时取材 切开固定 2）及时固定 3）液量充分 6---10倍 4）适度固定 24小时内 5）适宜温度 36---38度 6）适当搅拌 3、固定液的选择 1）单纯固定液： 10%中性福尔马林，最常用 乙醇固定液：80—95%，少用，主要用于核酸操作的固定 4%的多聚甲醛 用于细胞培养 2）混合固定液：AF; Bouin; Carnoy; Zenker. 4、操作方法： 小标本：6—10倍液体量 4小时 大标本：切开固定 18小时 三、 取 材 1、概念：对标本客观描述+切成小片装入小盒 2、取材环境：略 3、操作过程：核对、观察与描述（2.0x1.5x0.3cm)、记录、存档或照相 4、注意事项：略 四、 组织脱水 利于透明剂和石蜡的渗入 1、手工脱水 1）器械：大标本缸；浸蜡缸；脱水篮；恒温烤箱 2）流程：4%中性甲醛3 h 80%酒精1 h 90% 1 h 95%过夜 无水酒精a2 h 无水 酒精b2 h 二甲苯-无水酒精30分钟 二甲苯a30` 二甲苯b1 h 石蜡a、b、c(60度）各1 h 。 2、半自动/全自 动脱水机 五、 包 埋 1、意义 可以达到一定的硬度和韧度，有利于切片 2、步骤 熔化石蜡 注入模具 放入组织块 冷冻 待切蜡块 3、注意事项 1） 镊子要加热 2）包埋盒内无水及其他异物 3）蜡温度58---60度 4）注意包埋面及边缘 六、 石蜡切片 1、切片方法： 1）平推式石蜡切片； 2） 旋转式石蜡切片 2、操作步骤 （ 略） 3、注意事项 （ 略） 七、常规染色（HE） 苏木精（hematoxylin)和伊红（eosin)染色方法，简称HE染色法。 1、人工染色法：古老而实用，步骤30步（略） 注意事项： 1）烤片温度：恒温箱 75°c 2）脱蜡要彻底： 3次二甲苯 3）苏木精、伊红染液配制准确，要经常过滤 4）HCL/氨水要经常更换 5）脱水要充分 6）用中性树胶封片 7）在通风良好的环境中操作 8）所有步骤严格按照标准进行 2、自动染色机染色（略） 八、封 片 1、手工封片 注意事项（略） 2、机器封片 1）机器胶带封片机 2）机器盖玻片封片机 * * *