6.细胞分析与检测技术内容资料.pptVIP

细胞分析与检测技术;;;1. 构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜放大成虚像。;;Light Pathway of Microscope;3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。。 光学显微镜的分辨力 R=0.61λ/N．A． 其中λ为入射光线波长； N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2， n=介质折射率； α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。;表一、几种介质的折射率;显微镜的几个光学特点： 介质折射率越接近镜头玻璃的（ 1. 7 ）越好。 sin α /2的最大值小于1；油镜介质为香柏油，镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm，光镜分辨力约为0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微镜的最大有效倍数为1000X。;荧光显微镜 Fluorescent microscope;;Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green;激光共聚焦扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM;laser confocal scanning microscope, LCSM;激光共聚焦扫描 显微镜光路图;LCSM Image of a Xenopus Melanophore microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) /;暗视野显微镜 dark field microscope;把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。 环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与聚光器之间。 相位板（annular phaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。;原理;（六）偏光显微镜polarizing microscope;（七）微分干涉差显微镜 Differential interference contrast microscope （DIC）;物镜与照明系统颠倒； 用于观察培养的活细胞，通常具有相差或DIC物镜，有的还具有荧光装置。 ;（九）当代显微镜的发展趋势;（二）电子显微镜; 原理 以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比。 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。 分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。 用于观察超微结构（小于0.2μm）。;表二、不同光线的波长;TEM LIGHT PATHWAY;透射电子显微镜;制样技术;;2）负染技术;3）冰冻蚀刻 freeze-etching;an onion root tip cell with no etching.;培养细胞内面的深度蚀刻电镜照片，示 Clathrin衣被;20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构。 分辨力为6~10nm，由于人眼的分辨力（区别荧光屏上距离最近两个光点的能力）为0.2mm，扫描电镜的有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。;;工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。;SEM LIGHT PATHWAY;人类红细胞;酵母;人类精子;扫描隧道显微镜scanning tunneling microscope，STM;扫描隧道显微镜原理;STM image of a DNA molecule;原子力显微镜 Atomic Force Microscope (AFM) ;Schematic drawing of AFM;（三）显微操作技术micromanipulation technique;显微操作仪;转基因显微操作过程 ;三. 细胞生物化学与  分子生物学技术;任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞是困难的。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 ;1．台盼蓝法 活细胞不被染色，死细胞染成蓝色； 用活细胞占细胞中的百分比