基于壳聚糖的纳米凝胶口服药物输送载体的构建及其透粘膜机理的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位 或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论 文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 --------------------------------------------------------------------- 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学 技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络 向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 基于壳聚糖的纳米凝胶口服药物输送载体的构建及其透粘 膜机理的研究 摘要 化学治疗是抑制恶性肿瘤最常用也是最有效的治疗方式。目前，大多数用于 化学治疗的抗癌药物一般采用静脉滴注的给药方式。静脉滴注的给药方式虽然直 接有效，但同时也具有耗时长，副作用大，无法连续治疗的缺点。口服抗癌药物 相对施药方便，耗时短，病患依从度高，但胃肠道和肝脏的首过效应使得口服化 学疗法难以实现。壳聚糖(Chitosan, CS)作为一种天然的阳离子多糖，具有良好的 生物相容性和组织亲和性，它能够可逆性的打开小肠上皮细胞间紧密连接，使药 物通过细胞旁途径进入人体循环，在口服药物输送领域具有较好的应用前景。 对 CS 进 行 羧 甲 基 化 修 饰 ， 制 备 出 中 性 条 件 下 可 溶 的 羧 甲 基 壳 聚 糖 （Carboxymethyl chitosan, CMCS）,红外光谱检测证实了羧甲基基团成功连接在 壳聚糖分子骨架上，乌氏粘度法测定 CMCS 的分子量为 12 kDa，元素分析结果 表明 CMCS 的脱乙酰度和羧甲基取代度分别为 81 %和 92 %。分别以 3H-吲哚菁 型生物荧光标示染料（Cy3 NHS Ester）和异硫氰酸荧光素（FITC）为荧光标记， 共价连接在 CS 和 CMCS 主链上（Cy3-CS，FITC-CMCS）,用于对载体材料定位 示踪。 以离子交联法制备 CS 纳米凝胶（CS-nanogels，CS-NGs），平均粒径和 zeta 电位分别为 187.8 nm 和+33.4 mV，以聚电解质凝聚法合成了 CS/CMCS 纳米凝 胶（CS/CMCS-nanogels, CS/CMCS-NGs），平均粒径和 zeta 电位分别为 202.4 nm 和 -40.7 mV 。 透 射 电 镜 观 察 CS-NGs 和 CS/CMCS-NGs 均为球形，其中 CS/CMCS-NGs 形状规则，粒径大小均一，分散均匀，而离子交联法制得的 CS-NGs 为不规则球形，粒径分布较宽，并有团聚现象出现。溶血实验表明，CS-NGs 和 CS/CMCS-NGs 的红细胞溶血率均低于 5 %，符合医用材料对于溶血率的要求。 蛋白吸附实验表明，CS-NGs 和 CS/CMCS-NGs 对牛血清蛋白（Bovine serum albumin， BSA）的非特异性吸附率较低，结合溶血实验结果表明两种纳米凝胶 有较好的血液相容性。采用 MTT 法检测了 CS-NGs 和 CS/CMCS-NGs 的细胞毒 性，结果表明两种纳米凝胶对胎鼠成纤维细胞（MEFs）、人脐静脉内皮细胞 I （HUVEC）、人结直肠腺癌细胞（Caco-2）具有良好的细胞相容性，当浓度为 1000μg/mL 时，对人乳腺癌细胞（MCF-7）表现出潜在的细胞毒性。 以盐酸阿霉素（Doxorubicin hydrochloride，DOX）为模型药物，通过离子交 联 / 聚电解质凝聚法 结合透析的方法制备 了 包载 DOX 的壳聚糖纳米凝胶 （ DOX:CS-NGs ） 和 包 载 DOX 的 壳 聚 糖 / 羧甲基壳聚糖 纳米 凝胶 （DOX:CS/CMCS-NGs），其平均粒径分别为 209.6 nm 和 279.3 nm；zeta 电位分 别为 32.8 mv 和-33.8 mv；DOX 包封率分别为 35.43 %和 72.87 %；DOX 包载量 分别为 14.9 %和 21.4 %。利用透析法研究 DOX:CS-NGs 和 DOX