B-8水痘减毒活疫苗制造及检定规程修订稿(草案)0411-副本.doc

科兴（大连）疫苗技术有限公司 风疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）7 PAGE 3 PAGE13 / NUMPAGES31 科兴（大连）疫苗技术有限公司 Sinovac (Dalian) Vaccine Technology Co., Ltd. 水痘减毒活疫苗B-8 PAGE1 / NUMPAGES31 水痘减毒活疫苗 制造及检定规程修订稿（草案） 报告完成人签字： 日期： 课题负责人签字： 日期： 项目负责人签字： 日期： 科兴（大连）疫苗技术有限公司 Sinovac (Dalian) Vaccine Technology Co., Ltd. 水痘减毒活疫苗 B-8 水痘减毒活疫苗 制造及检定规程（草案） Shuidou Jiandu Huoyimiao Varicella Vaccine，Live 根据水痘减毒活疫苗书面发补意见和药品审评咨询会专家意见进行修订。 制造及检定规程修订前后对比 规程修订前后对比 编号 修订前 修订后 修订说明 2.1.2 按适宜比例，连续传代至细胞工厂 按1:2～1:4的传代比例，连续传代至细胞工厂 明确传代比例 2.2.2 置35.0℃±1℃培养72±4～102±4小时，冷冻、融化一次收获水痘病毒。 置35.0℃±1℃培养68～106小时，水痘病毒典型病变范围应达到60%以上进行病毒收获，冷冻制备毒种。 明确病毒收获标准 2.2.3 工作种子批应至少进行（1）～（4）项检定 增加（5）检项，更改为工作种子批应至少进行（1）～（5）项检定 增加质量控制项目 2.3.1 细胞制备 按2.1.2项进行。 取自同批工作细胞库的1支或多支细胞，用细胞复苏液复苏后，于36.5℃±1℃静置培养，培养4～5天，待细胞生长至单层后，用胰蛋白酶消化，细胞生长液分散细胞，按1:4的传代比例连续传代至生产用细胞代次，于36.5℃±1 明确细胞制备方法 2.3.2培养液 新生牛血清 灭能新生牛血清 明确采用灭能新生牛血清 2.3.4病毒接种和培养 用磷酸盐缓冲液（PBS溶液）洗涤细胞表面 用不少于原倍培养液量的磷酸盐缓冲液（PBS溶液）洗涤细胞表面 明确洗换液体积 2.3.5病毒收获 病毒洗换后，于病毒接种后的72±4~102±4小时（同一MOI按同一时间范围收获）、病变范围应达到60%以上，且病灶呈现带状颗粒样病变时进行病毒收获。倾去病毒维持液，加入疫苗收获液A，破碎病毒细胞，收集悬液，即为单次收获液。 病毒洗换后，于病毒接种后的68~106小时（同一MOI按同一时间范围收获）、水痘病毒典型病变范围达到60%以上时，倾去病毒维持液，加入疫苗收获液A，室温2小时内收获病毒液，即为单次收获液。 明确病毒收获工艺及工艺参数，包括：收获温度、收获时间 2.3.7单次收获液保存 置-20℃以下低温保存 置-60℃以下低温保存 根据工艺研究结果确定保存条件 2.3.8原液制备 同一细胞批生产的多个单次收获液合并后，加入稳定剂（冻干保护剂和微量保护剂按4:1混合）并去除细胞碎片，即为原液 同一细胞批生产的多个单次收获液合并后，加入稳定剂（冻干保护剂和微量保护剂按4:1混合），采用功率为41%～100%，流速为500～1000ml/min的超声方法除去细胞碎片，收集含有病毒的上清液，即为原液。 明确超声方法除去细胞碎片 2.3.10原液保存 置-20℃以下低温保存，不超过30天 置-60℃以下低温保存，不超过12个月 根据工艺研究结果确定保存条件 2.4.1配制 将水痘减毒活疫苗原液按4.5 lgPFU/ml病毒滴度加入适量稀释液B配制成半成品 将水痘减毒活疫苗原液按4.8 lgPFU/ml病毒滴度加入适量稀释液B配制成半成品 根据工艺研究结果确定半成品配制参数 2.5.5成品检定 按3.3项进行。 按3.4项进行。 书写错误 3.1.1病毒滴定 病毒滴度应不低于4.5 lgPFU/ml 病毒滴度应不低于4.8 lgPFU/ml 提高质量标准 3.1.4 增加检查项目 细胞破碎率检查 显微镜下观察，应无完整细胞，细胞破碎率为100%。 增加检查项目 3.2.1病毒滴定 病毒滴度应不低于4.5 lgPFU/ml 病毒滴度应不低于4.8 lgPFU/ml 提高质量标准 3.4.4 病毒滴定 增加放行标准 企业放行标准为4.0~4.8 lgPFU/ml；效期内标准为不低于3.6 lgPFU/ml