课件：生化实验期末蚕豆病设计性实验报告.ppt

* * 年级：2012级 专业：麻醉学 班级：麻醉班 设计性实验报告 第三实验室 第四组 时间：2013年6月11日星期一 报告人：谢俊雄 组员：计树雄、黎国燕、李玲、罗靖、王玺赟、 王玉宣、谢俊雄、雍雪进、张茜、李俊 案例分析 案例分析 案例： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样（发生溶血性贫血）色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩c膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5μmol/L，结合胆红素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 红细胞 1.98×1012/L （6.0-7.0）×1012/L ↓ 血红蛋白 53g/L （170-200)g/L ↓ 血清总胆红素 85.5μmol/L （3.4-17.1）μmol/L ↑ 结合胆红素 13.7μmol/L 0～3.42μmol/L ↑ 未结合胆红素 71.8μmol/L 0～13.68μmol/L ↑ 尿蛋白（++） 潜血(+) 尿胆红素(－) 尿胆素原(+) 实验室检查项目 正常值 患儿检查值 案例分析 皮肤及巩膜黄染 黄疸 发病前曾食用蚕豆 其姐亦类似病史 Bp：80/60mmHg P：150bpm 排尿呈酱油样 溶血性贫血 T：38 ℃ 体温升高 B:40bpm 呼吸急促 蚕豆病 红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症[1] 案例分析 设计实验 G6PD基因分析 G6PD确诊试验 红细胞G6PD活性测定 G6PD荧光斑点试验 G6PD筛选试验 高铁血红蛋白还原试验 特异性不高 国际血液学标准化委员会 (ICSH)推荐 实验设计 G6PD荧光斑点试验[2] G6PD 实验原理：葡萄糖-6-磷酸（G6P）在G6PD作用下形成6-磷酸葡萄糖（6PGA）,同时使NADP转变为NADPH,后者在340nm波长紫外线照射下产生荧光。所以将含有G6P和NADP等的混合试剂与血混匀，通过观察滤纸上有荧光出现时间可判断G6PD活性。 NADP NADPH G6P 6PGA 实验原理 340nm紫外线 荧光 试剂：10mmol/L G6P钠盐、7.5mmol/L NADP、1g/dL皂素、250mmol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4），蒸馏水 仪器：长波紫外灯、滤纸、水浴箱 G6PD荧光斑点试验 实验流程 G6PD荧光斑点试验 1反应液的配制：10mmol/l G6P钠盐0.1ml、7.5mmol/l NADP0.1ml、1g/dl皂素0.2ml、250mmol/l磷酸盐缓冲液（pH7.4）0.3ml，蒸馏水0.3ml混匀。 其中除皂素外，均可于4℃下保存半月，皂素必须新鲜配制。反应混合液在室温和冰箱中均不易保存。因此最好在临用前根据用量临时混合。 3.取试管，加10μl全血+100μl反应液，混匀，取一滴于滤纸上（第一斑点 ）→作为对照； 2.将上液置于37℃水浴10min ，再取一小滴滴于滤纸上（第二斑点）→实验组 ； 4.晾干后，于长波紫外灯下（365nm）观察结果并计时 。 实验流程 G6PD荧光斑点试验 正常人： 0min斑点无荧光，5-10min出现， 10min荧光最强 临床诊断： 轻度缺陷者：0-10min荧光很弱或不出现 中度缺陷者：10-30min出现荧光 严重缺陷者：30min内不出现荧光 结果分析 G6PD荧光斑点试验 红细胞G6PD活性测定 实验原理：基本原理同G6PD荧光斑点实验。不同的是利用紫外光分光光度法定量测定酶