奇果菌素促进宫颈癌hela细胞凋亡的蛋白质组研究-中国药理学通报.pdfVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ｍａｒ；２９（３）：４１７～２０ ·４１７· 网络出版时间：２０１３－３－７１４：４８　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１４４８．０２６．ｈｔｍｌ 奇果菌素促进宫颈癌 ＨｅＬａ细胞凋亡的蛋白质组研究 １ ２ ３ １ 罗永红 ，曾海涛 ，胡红珍 ，倪观太 （１．皖南医学院弋矶山医院妇产科，安徽 芜湖　２４１００１；２．中山大学第三附属 医院妇产科，广东广州　５１００７８；３．深圳市福田妇幼保健院妇产科，广东深圳　５１８０４５） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０３．０２６ 株由中山大学中心实验室提供。奇果菌素（纯度 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０３－０４１７－０４ ９９％，ＨＰＬＣ分析）购自昆明植物研究所。ＨｅＬａ细 中国图书分类号：Ｒ２８４１；Ｒ３２９２５；Ｒ３４１；Ｒ７３７３３０２２ ５ －１ 胞用含有 １０％的胎牛血清、１０Ｕ·Ｌ 青霉素和 摘要：目的　寻找与奇果菌素促进宫颈癌 ＨｅＬａ细胞凋亡相 －１ １２５ｍｇ·Ｌ 链霉素的ＤＭＥＭ培养基（Ｇｉｂｃｏ公司）， 关的蛋白质。方法　随机将宫颈癌ＨｅＬａ细胞分成两组，一 置于３７℃、５％ ＣＯ培养箱内培养。细胞以０２５％ ２ 组为对照组，另一组以奇果菌素（剂量为半数抑制率）处理 的胰蛋白酶（含００２％ＥＤＴＡ）消化，每２－３天传代 ２４ｈ。提取蛋白质做双向电泳（２ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ， １次。取指数生长期的细胞进行实验。随机将 Ｈｅ ２ＤＥ），基质辅助激光解吸／离子化飞行时间质谱仪（ｍａｔｒｉｘ ａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｓ Ｌａ细胞分成两组：一组为对照组，另一组用奇果菌 ［３］ 素［剂量为半数抑制率（ＩＣ ）５０ ｍ］处理 。Ｔｒｉｓ、 ｃｏｐｙ，ＭＡＬＤＩＴＯＦＭＳ）鉴定２组细胞间有明显差异表达的 ５０ μ 蛋白质。结果　奇果菌素作用于ＨｅＬａ细胞的蛋白质组，质 ＳＤＳ、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、ＰＭＳＦ、超纯尿素、 谱鉴定出６种蛋白质表达差异有显著性，分别是：塌陷反应 过硫酸铵、ＴＥＭＥＤ、ＤＴＴ、甘氨酸和甘油为ＢＢＩ公司 介导蛋白１（ＣＲＭＰ１）、转胶蛋白２（Ｔｒａｎｓｇｅｌｉｎ２）、磷酸化应 产品。ＣＨＡＰＳ、碘代乙酰胺和硫脲购自美国Ｃｉｐｈｅｒ 激诱导蛋白１（ＳｔＩＰ１）、腺苷酸环化酶（ＡＴＰａｓｅ）、磷酸甘油酸 ｇｅｎＢｉｏｓｙｓｔｅｍ公司，其余试剂为国产分析纯。 变位酶１（ＰＧＭ１）和原肌球蛋白４（ＴＰＭ４）；其中ＳｔＩＰ１表达 ［４］ １．２　双向电泳及图像分析 　在分离的样品蛋白 下调，其他蛋白均上调。结论　奇果菌素能够通过诱导宫颈 －１