grp78重组表达腺病毒的构建及在hepg2细胞的表达及其相关功能研究.pdfVIP

下载本文档

5
0
约2.92万字
约 5页
2019-04-08 发布于天津
举报
版权申诉

grp78重组表达腺病毒的构建及在hepg2细胞的表达及其相关功能研究.pdf

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

— 384 — 重庆医科大学学报年第卷第期 .Vol.No.4） 2016 41 4 2016 41 DOI 基础研究：10.13406/ki.cyxb.000889 GRP78重组表达腺病毒的构建及在HepG2细胞的表达及其相关功能研究 1 1 1 2 3 爽张祥魏杰汪德强罗淼吴，，，，（重庆医科大学检验医学院，重庆；感染性疾病分子生物学教育部重点实验室，重庆； 1. 400016 2. 400016 3. 重庆市渝北区人民医院医学检验科，重庆 400016）【摘要】目的：构建葡萄糖调节蛋白（，）重组表达腺病毒，并感染细胞 78 glucose regulated protein 78 GRP78 pAd-GRP78 HepG2 建立能够高表达GRP78 的细胞模型，同时在HepG2 细胞中研究重组表达GRP78 腺病毒对细胞增殖能力的影响。方法：利用腺病毒穿梭质粒pAdTrack-TO4 构建载有GRP78 基因的穿梭质粒pAdTrack-TO4-GRP78 载体，并通过基因测序鉴定载体序列正确。将载体用Pme Ⅰ酶切线性化，与AdEasy-BJ5183 感受态细胞进行基因同源重组。将重组后的腺病毒载体经Pac Ⅰ酶切线性化后，转染到细胞中进行包裹，根据增强绿色荧光蛋白（，）的表达判断重组腺 HEK293 enhance green fluorescent protein EGFP 病毒的包装情况。通过反复离心和低温裂解细胞提取GRP78 重组表达腺病毒。以人肝癌HepG2 细胞为目标，进行病毒感染。通过qRT-PCR 检测GRP78 基因表达情况，使用Western blot 检测GRP78 蛋白的表达。最后感染HepG2 细胞，通过MTS 比色法检测重组表达GRP78 腺病毒对细胞增殖的影响。结果：测序验证pAdTrack-TO4-GRP78 构建成功，酶切验证重组腺病毒载体构建成功。在细胞中将包裹，荧光检测结果表示病毒包装成功。使用感染 pAd-GRP78 HEK293 pAd-GRP78 GPF pAd-GRP78 人肝癌细胞，检测到细胞中基因的过表达，方法检测到蛋白的高表达。检测 HepG2 qRT-PCR GRP78 Western blot GRP78