动物饲料和饮用水中已烯雌酚的测定酶联免疫法.pdfVIP

ICS65.020.01 B46 备案号：18651-2006 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 906—2006 动物饲料和饮用水中己烯雌酚的测定 酶联免疫法 Determination of Diethylstilbestrol in animal feeding stuffs and water by ELISA 2006-03-25 发布 2006-05-25 实施 江苏省质量技术监督局 发布 DB32/T 906—2006 前 言 为了加强对己烯雌酚的有效监控，进一步规范畜禽养殖中投入品的管理，特制定本标准，以从源头 上监控己烯雌酚的非法使用，从而保证畜产品的安全和人民身体健康。 本标准按照GB/T1.1-2000 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T1.2-2000 《标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》编写。 本标准由江苏省农林厅提出。 本标准起草单位：江苏省饲料监察所。 本标准主要起草人：耿士伟、时勇、邵德佳、毕昊容、冯三令、储瑞武、贾书静。 DB32/T 906—2006 动物饲料和饮用水中己烯雌酚的测定 酶联免疫法 1 范围 本标准规定了动物饲料和饮用水中己烯雌酚（DES ） 酶联免疫法测定的原理、试剂和材料、仪器、 试样分析、允许差。 本标准适用于酶联免疫法测定动物饲料和饮用水中己烯雌酚的量。方法最低检出限为5μg/kg。 2 原理 测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对兔IgG （己烯雌酚抗体，简称DES抗体）的羊抗体。 加入DES抗体，标准或样品溶液。己烯雌酚与DES抗体连接，同时DES抗体也与羊抗体连接。洗涤步骤 后，加入DES酶标记物，DES酶标记物与孔中的未结合的（空位）DES抗体连接，然后在洗涤步骤除去 未结合的DES酶标记物。将酶基质和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并且孵育。结合的DES酶标记 物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处测量， 吸收光强度与样品中的DES浓度成反比。 3 试剂和材料 3.1 甲醇，分析纯。 3.2 滤纸，定性滤纸。 3.3 80% 甲醇水溶液：量取80mL 甲醇，加入蒸馏水至100mL。 3.4 40% 甲醇水溶液：量取40mL 甲醇，加入蒸馏水至100mL。 4 仪器 4.1 恒温培养箱。 4.2 粉碎机。 4.3 振荡器。 4.4 酶标仪。 4.5 微量移液枪：单道1mL～5mL 可调、10μL～100μL可调和多道50μL～250μL可调。 5 试样分析 5.1 样品提取 5.1.1 饲料 称取2.0g粉碎后的饲料于50mL离心管中，加入80% 甲醇水溶液20mL于振荡器上振荡3min ，滤纸过 滤后取滤液1mL，加入1mL蒸馏水稀释。取稀释液1mL，加入40% 甲醇水溶液9mL，摇匀，供酶联免疫 吸附测定用。 5.1.2 饮用水 直接量取1mL，加入40% 甲醇水溶液4mL，摇匀，供酶联免疫吸附测定用。 5.2 测定 使用前将试剂盒及处理后的试样在室温（20 ℃～24 ℃）下放置1h～2h 回温。 5.2.1 将标准和试样（按双平行实验计算）所用数量的孔条插入微孔架，记录标样和试样的位置。加 入20μL标样以及处理好的样品液到各自的微孔中。标样和样品做两个平行实验。 1