双孢蘑菇子实体原基与菇蕾蛋白质表达变化分析探究.pdfVIP

食用菌学报@2012．19(3)：15～20 文章编号：1005—9873(2012)03—0015—06 双孢蘑菇子实体原基与菇蕾蛋白质表达变化分析 陈美元 (福建省农业科学院食用菌研究所，福建福州350014) 摘 要：为探讨双孢蘑菇(Ag口rfc“s 6l印DrMs)子实体发育初期的蛋白质表达变化，采用双向电泳(two． dimensional 个表达差异明显的蛋白质。经质谱分析(MALDI-ToF／ToF Ms)和数据库检索，鉴定到10个差异蛋白质，其 中乙醇氧化酶与醇类代谢相关，磷酸烯醇式丙酮酸水合酶与能量代谢相关，蛋白酶体、5．甲基四氢三谷氨酸．同 型半胱氨酸甲基转移酶、维生素B。z不依赖型甲硫氨酸合成酶、1．吡咯琳．5．羧酸脱氢酶、NADP依赖的谷氨酸 脱氢酶与氨基酸或蛋白质代谢直接相关，而wD40重复蛋白、肌动蛋白、热激蛋白70则与细胞内多种生物过 程有关，在细胞的生长发育分化等过程中起着重要的作用；其余4个仅在双孢蘑菇蛋白质组中鉴定到功能未 知的蛋白质。 关键词：食用菌；蛋白质组；双向电泳；质谱分析；蛋白质鉴定 近年来食用菌生长发育机理研究发展迅速， 育密切相关的蛋白质，为双孢蘑菇子实体发育机 取得了许多研究成果。已报道的食用菌发育机 理的研究提供参考。 理的研究主要包括：环境条件、培养基质、有益微 1材料与方法 生物对食用菌发育的影响、菌丝与子实体营养成 分的变化、发育相关酶学研究以及发育基因研究 1．1菌株 等方面L1I。对于双孢蘑菇(A卯rlc“s6站pDr“s)的 研究，主要是其发育及成熟过程中的疏水蛋白基 由福建省农业科学院食用菌研究所种质资源与 因II￡y硝瞳’3]、子实体原基的超微结构特征[4]、不遗传育种研究室保藏并提供。 同发育阶段的尿素与脲酶含量及脲酶基因的表 1．2试剂 达水平∞3等。 等电聚焦IPG预制胶条、40％丙烯酰胺．甲 蛋白质双向电泳(two．dimensional 叉双丙烯酰胺(37．5：1)溶液、载体两性电解质 electrophoresis，2．DE)是多年来蛋白质组学研究 的主要方法，在食用菌研究中也得到一定的应 胺丙基)．二乙胺]．丙磺酸(CHAPs)、二硫苏糖醇 用[6．13]。在食用菌发育机理的蛋白质组学研究方(DTT)、十二烷基磺酸钠(SDs)、甘氨酸、四甲基 面，SAKAMoTO等研究了金针菇(Ff日，，l，，l“fi，l口 司产品；Bradford蛋白质定量试剂盒及其它试 vef“ffpes)光照及低温刺激下菌盖形成的差异蛋 白质组[7’8]，刘靖宇等应用iTRAQ标记结合二维剂均购自上海生工生物工程服务有限公司。 液相色谱串联质谱技术对草菇不同生长发育阶 1．3取样 段的差异蛋白质组进行了研究[14’15|，其它食用菌 As2796菌株进行常规栽培管理‘16]。在子实 包括双孢蘑菇在这方面的研究未见报道。笔者 体原基(直径约2mm)阶段和菇蕾(直径约 6 应用2．DE技术，对双孢蘑菇子实体原基与菇蕾 mm)阶段进行取样，第一潮和第二潮子实体样 蛋白质表达差异进行分析，以期发现与子实体发 品作为试验重复。 收稿日期：2012一08—17原稿；2012—09—01修改稿 研究内容 作者简介：陈美元(1972一)，男，1995年毕业于厦门大学，博士，高级工程师，主要从事食用菌遗传育种研究。