基于SRAP的松茸与假松茸特异性分子标记.pdfVIP

食用菌学报@2015．22(1)：21--25 DOI：j．cnki／1005—9873．2015．01．004 基于SRAP的松茸与假松茸特异性分子标记 兰西，全雪丽，金美玉，吴松权+ (延边大学农学院，吉林延吉133000) 摘 要：从300对SRAP引物组合中分别筛选出一对对松茸(Tricholomamatsutake)有特异性的引物(ME6， EM26)与一对对假松茸(Tricholoma 特异条带进行克隆、测序；在此基础上重新设计引物后成功地构建了松茸特异性分子标记(Tml／Tm2)和假 松茸特异性分子标记(Tbl／Tb2)。Tml／Tm2在所有供试松茸样品中均能扩增出243bp的条带，Tbl／Tb2 在所有供试假松茸样品中均能扩增出389 bp条带。这两种标记可在分子水平上快速、准确地鉴定出松茸和 假松茸。 关键词：松茸；假松茸；特异性分子标记 1．2 松茸(Tricholomamatsutake)，口蘑属[1七]，能SRAP分子标记筛选 1．2．1 与寄主植物根共生形成外生菌根[3]，由于独特的香 SRAP引物 味被誉为“菌中之王”[4]，且具有很高的药用价 引物由上海英潍捷基贸易有限公司合成，10 值[5]。由于难以合成有活力树木根系的营养条件 个上游引物(编号MEl～MEl0)和30个下游引 和生物环境，目前还不能实现人工栽培∞]。松茸由 于近年来的过度采挖现已经被列为国家二级保护 物种[7]。假松茸(Tricholomabakamatsutake)与松 茸同是口蘑属菌根菌口‘9]，外观、香味和口感与松 茸有相似之处[10|，价格却比松茸低得多，因此经 常被冒充松茸出售。传统方法区别松茸与假松 TACGAATTATG)。 茸主要通过鉴别子实体特征和子实体微观特征， 1．2．2样品基因池建立 近年来也有一些分子水平的鉴别报告，如基于 分别选取表1中每个编号1至10的子实体 ITS序列[11|，基于RAPD的SCAR标记[123等。 各一个，削掉表皮，取1．5g(包含菌柄、菌盖)，按 为了进一步从基因水平上探索真假松茸的特异 CTAB[161法分别提取不同样品基因组DNA，电 性标记，笔者在筛选SRAP引物、找到特异性分泳检测后用BSA方法[173从1至5号样品中各取 子标记的基础上设计了区别真假松茸的特异性 500 ng混合组成松茸基因池，6至10号样品中各 引物，可准确快速鉴定出真假松茸。 取500 ng混合组成假松茸基因池。 1．2．3 SRAP反应条件 1材料与方法 反应体系总体积为20弘L，其中2pL模版 1．1材料 DNA(5 ng／t_￡L)，2 pL引物(2_umol／L)，2pL dNTP(2 B 笔者所在实验室从国内外不同地区收集了 mmol／L)，0．4