课件：蚕豆病素材课件.ppt

四、要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答） 基因结构分析法 我组讨论认为：要想探讨该病发生的分子基础 ，需要对目的基因进行基因结构分析，即DNA序列检测 DNA序列测定方法 直接法 间接法：对于未知片段，或片段过长，用几种方法（RFLP；PCR-RFLP；SSCP）来粗略的估计待分析基因的一级结构是否与对照基因相同 双脱氧末端终止法（Sanger法） 化学裂解法（Maxam-Gilbert法） DNA的自动化测序 DNA序列测定方法 DNA链的方向是5? → 3? 交替的磷酸基团和戊糖构成了DNA的骨架 (backbone)。 （构成DNA） 脱氧核糖(deoxyribose) 双脱氧末端终止法（Sanger法） Sanger法是根据双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)在DNA合成过程中不能形成3’,5’-磷酸二酯键而导致链延伸终止的原理，利用四种ddNTP代替部分脱氧核苷酸（dNTP）作为底物进行DNA合成，从而获得在不同部位终止反应的大小不同的DNA链，结合高分辨率变性聚丙烯凝胶电泳分离，就可以对DNA序列进行分析。 TAATCTGCAGGC 3’ 5’ 加入引物； 32P-dATP,dGTP,dTTP； DNA聚合酶 3’ TAATCTGCAGGC 5’ 5’ 3’ primer ddGTP ddATP ddTTP ddCTP ATTAG ATTAGACG A ATTA ATTAGA AT ATT ATTAGACGT ATTAGAC ATTAGACGTC ATTAGACGTCC ATTAGACGTCCG ATTAG ATTAGACG A ATTA ATTAGA ATT ATTAGACGT ATTAGACGTC ATTAGACGTCC AT ATTAGAC 聚丙烯酰胺凝胶电泳 G A T C GCCTGCAGATTA 3’ 5’ ATTAGACGTCCG 五、患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答） 患者体型瘦小与该病症有关 蚕豆病是因为体内缺乏G6PD， G6PD主要影响体内的磷酸戊糖途径 该途径主要生成两种重要的物质即5-磷酸核糖和NADPH 5-磷酸核糖影响： 1：核酸的合成 2：体内己糖和戊糖的代谢 3：3—7碳原子糖类物质的相互转化 NADPH影响： 1：体内以NADPH作为供氢体合成多种活性物质如胆固醇 脂肪酸 和一些非必需氨基酸 2： NADPH可作为羟化酶的辅酶，参与体内生物转化作用 3： NADPH参与吞噬细胞的杀菌作用 4：维持GSH的正常水平 GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化 使蛋白质或酶处于活性状态 磷酸戊糖途径中生成多余的核糖转变为6-磷酸果糖和3-磷酸甘油醛进入糖酵解途径，G6PD缺乏使得糖代谢受到影响。脂酸可以合成甘油三酯，其主要功能是储存和氧化能量，机体难以合成甘油三酯则消耗原有储备的甘油三酯，使得机体消瘦。同时体内的一些生物活性物质功能发生障碍，如胆固醇不能直接氧化但能转化为胆汁酸，类固醇激素 维生素D3参与物质代谢调节，胆汁酸具有促进脂类消化和吸收的作用。维生素D3主要参与体内血钙和血磷的调节。生物转化作用可以对体内大部分非营养物质尽心代谢转化，或使有毒物质的毒性减低或消除，增强这些非营养物质的水溶性和极性，从而易于从胆汁或尿液中排除。 GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化 使蛋白质或酶处于活性状态，蛋白质一方面可以作为营养物质提供能量一方面又发挥着其它重要的生物功能，而酶使得生物体内的化学反应有条不紊的进行。 综上所述：蚕豆病使得该男孩体内发生糖，蛋白质，脂类物质的代谢障碍，一些重要的生物活动受到影响，加之因疾病带来的一些身体上和精神上的折磨，这些因素使得他的身体比同龄孩子削瘦。 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析 * * 2010级本科分子生物学实验设计 案例： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5μmol/L，结合胆红素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 阅读下列案例，根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。 一、根据上述患儿的临床表