拟南芥氰丙氨酸合酶CYS-C1基因扩增及多克隆抗体制备.pdfVIP

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆ Ａｇｒ.Ｓｃｉ.),２０１７,３３(６):１２３５~１２４１ ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｊｓｎｙｘｂ.ｃｏｍ １２３５ 余璐璐,龚绒雪,吕林涛,等. 拟南芥氰丙氨酸合酶 ＣＹＳ-Ｃ１基因扩增及多克隆抗体制备[Ｊ].江苏农业学报,２０１７,３３ (６):１２３５-１２４１. ｄｏｉ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００-４４４０.２０１７.０６.００６ 拟南芥氰丙氨酸合酶 ＣＹＳ-Ｃ１ 基因扩增及多克隆抗体 制备 １ １ １ １ １ １,２ 余璐璐 , 龚绒雪 , 吕林涛 , 杨 虹 , 裴周颖 , 徐 飞 (１.武汉生物工程学院生命科学与技术学院,湖北 武汉 ４３０４１５; ２.武汉生物工程学院应用生物技术研究中心,湖北 武汉 ４３０４１５) 摘要: 已有研究结果表明,植物自身能产生剧毒的氰化物(如ＨＣＮ),而氰丙氨酸合酶(Ｃｙａｎｏａｌａｎｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ, ＣＡＳ)是植物解氰作用的关键酶,在植物生长、发育及逆境胁迫响应过程中起重要作用. 本研究通过克隆拟南芥 ＣＡＳ 合酶关键基因ＣＹＳ-Ｃ１全长后,构建原核表达载体ｐＥＡＳＹ-ＣＹＳ-Ｃ１并导入大肠杆菌Ｅ. ｃｏｌｉ受体细胞中进行表达. 结果 表明,在大肠杆菌Ｅ. ｃｏｌｉ细胞中成功诱导出可溶性的ＣＹＳ-Ｃ１蛋白,其中ＩＰＴＧ最佳诱导时间为４ ｈ,最佳诱导浓度为 ０.２ ｍｍｏｌ/ Ｌ. 原核表达的ＣＹＳ-Ｃ１蛋白经Ｎｉ柱纯化并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果表明, ＣＹＳ-Ｃ１蛋白多克隆抗体的特异性较好. 本试验结果对于进一步开展ＣＡＳ合酶的功能研究奠定了基础. 关键词: 拟南芥; 氰丙氨酸合酶; 多克隆抗体 中图分类号: Ｑ７８５ 文献标识码: Ａ 文章编号: １０００-４４４０(２０１７)０６-１２３５-０７ Ｃｙａｎｏａｌａｎｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ＣＹＳ-Ｃ１ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ １ １ １ １ １ １,２ ＹＵ Ｌｕ-ｌｕ , ＧＯＮＧ Ｒｏｎｇ-ｘｕｅ , ＬＹＵ Ｌｉｎ-ｔａｏ , ＹＡＮＧ Ｈｏｎｇ , ＰＥＩ Ｚｈｏｕ-ｙｉｎｇ , ＸＵ Ｆｅｉ (１.Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｏｌｏｇｙ,ＷｕｈａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ,Ｗｕｈａｎ４３０４１５,Ｃｈｉｎａ; ２.Ｃｅｎｔｅｒｏｆ ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,ＷｕｈａｎＩｎｓｔｉ- ｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ,Ｗｕｈａｎ４３０４１５,Ｃｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｓｔｕｄｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｌａｎｔ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ ｃｙａｎｉｄｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ＨＣＮ,ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｔｏｘｉｃ ｔｏ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ. Ｈｏｗｅｖｅｒ,ｃｙａｎｏａｌａｎｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｋｅｙ ｅｎｚｙｍｅ ｏｆ ｃｙａｎｉｄｅ ｄｅｔｏｘｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｎｔ,ｗｈｉｃｈ ｐｌａｙｅｄ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ,ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ. Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ,ｔｈｅ ｆｕｌｌ-ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＣＹＳ-Ｃ１ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄｌｉｎｋ